RESUMEN: La malaria es un problema importante de salud pública y es causada por parásitos Plasmodium, transmitidos a los humanos por la picadura de mosquitos hembra del género Anopheles. En Colombia, las regiones El Bajo Cauca y Pacífico son actualmente las zonas más endémicas de malaria en el país. Para determinar la capacidad vectorial de las especies de Anopheles es necesario evaluar los parámetros entomológicos, como: abundancia, comportamiento de picadura, infectividad natural por Plasmodium spp. y el comportamiento y preferencia de alimentación; este último puede estar influenciado por factores intrínsecos o extrínsecos al vector. En este trabajo, se realizaron capturas de mosquitos empleando el método de malla polisombra y cebo humano protegido, entre las 18:00 y las 24:00 horas, en localidades endémicas de El Bajo Cauca y Pacífico, durante los años 2018-2021. Se realizaron censos de los animales presentes en los sitios de muestreo en un radio de 250 metros, durante los cuatro días de recolecta. Los mosquitos se identificaron mediante claves morfológicas y se confirmaron molecularmente por PCR-RFLP-ITS2. Las fuentes de alimentación con sangre de los mosquitos capturados reposando en las mallas fueron detectadas en ADN extraído del intestino de cada mosquito mediante PCR con cebadores dirigidos a los genes MT-CYB y COI para vertebrados. Se estimaron los índices de sangre humana e índices de forraje para determinar la preferencia de alimentación con sangre en las hembras alimentadas. Además, se determinaron índices entomológicos para los mosquitos capturados con método de cebo humano protegido: abundancia y composición de especies, actividad y hora de picadura, tasa de picadura al humano, tasa de infección y tasa de inoculación entomológica. En total, se recolectaron 1.927 especímenes Anopheles; en las localidades del Bajo Cauca, 188 en La Capilla, 311 en Villa Grande; en el Pacífico, 159 en la localidad San Antonio y 1.269 en Córdoba. Anopheles (Nys.) darlingi Root, 1926, fue la especie más abundante en Bajo Cauca y Anopheles (Nys.) nuneztovari Gabaldón, 1940, en el Pacífico colombiano. La tasa de picadura al humano más alta se detectó para An. nuneztovari en Córdoba-Pacífico con 77,5 picaduras por persona por noche (p/p/n) y para An. darlingi en Villa Grande-Bajo Cauca con 17,5 p/p/n; ambos con actividad principalmente en el intradomicilio descubierto. Se detectó infección por Plasmodium en An. nuneztovari de la localidad de Córdoba-Pacífico, con una tasa de infección- de 0,49 %, correspondiente a una tasa de inoculación entomológica de 25 picaduras infectivas por año. El índice de sangre humana más alto se detectó en los vectores principales An. nuneztovari (57,1%) y An. darlingi (40%). Sin embargo, An. nuneztovari mostró preferencia para alimentarse de sangre de perros y An. darlingi de sangre de cerdos, perros y Galliformes, antes que el humano. Estos resultados sobre los indicadores entomológicos y el comportamiento de alimentación de las hembras de Anopheles permiten conocer cuáles son las especies que están participando en la transmisión de malaria y tener una mayor comprensión de cuál es la dinámica de la enfermedad en las localidades endémicas evaluadas. Además, este trabajo aporta a la vigilancia entomológica, brindando información valiosa que puede usarse para orientar intervenciones de control efectivas, dirigidas a minimizar el contacto humano-vector de acuerdo a la bionomía de las especies.