Las infecciones del tracto urinario (ITU) son comunes en mujeres gestantes, siendo Escherichia coli (E. coli) el patógeno predominante. La resistencia bacteriana a antibióticos β-lactámicos por la expresión de β-lactamasas representa un problema en aumento en el ámbito global según datos de la Organización Mundial de la Salud. Objetivo: caracterizar fenotípicamente las β-lactamasas aisladas de uropatógenos recuperados en gestantes de una IPS de Neiva durante el periodo comprendido entre el 1 de enero del 2022 a junio del 2023. Metodología: descriptivo transversal, retrospectivo, desarrollada en una clínica de alto nivel de complejidad de Neiva. Resultados: se analizaron 111 urocultivos positivos de gestantes, estableciendo la frecuencia de uropatógenos y la presencia de β-lactamasas mediante métodos fenotípicos. Los resultados revelaron que E. coli fue el uropatógeno más frecuente, representando el 61% de los casos. Se identificó que el 3% de los uropatógenos presentaron el fenotipo BLEE, mientras que el 2% mostró el fenotipo AmpC y Carbapenemasas 1% por lo tanto el 94% no presentaron βlactamasas. Por otra parte, en el análisis de los datos se pudo encontrar resistencia a trimetoprima/sulfametoxazol en el 19%, cefalotina 11%, ciprofloxacino 11%, norfloxacino 10% y nitrofurantoína con 9%. Conclusión: se destacó un bajo porcentaje de uropatógenos productores de β-lactamasas en gestantes con ITU, siendo las BLEE más frecuentes que las AmpC y Carbapenemasas. Este hallazgo poco frecuente demuestra que la vigilancia, los mecanismos de resistencia han sido fortalecidos para mejorar las estrategias de tratamiento en este grupo de pacientes.