Objetivo: Determinar los agentes infecciosos causantes de la colecistitis grave y/o colangitis aguda y su sensibilidad antibiótica en pacientes manejados en el hospital universitario ‘San José’ durante el periodo de diciembre de 2013 y diciembre 2014. Material y métodos: Pacientes mayores de 18 años con colecistitis grave y/o colangitis aguda definida ésta por tríada de Charcot y/o parámetros de sepsis de origen biliar presentes al ingreso al Servicio de Urgencias según las guías de Tokyo 2013, que fueron manejados en el Hospital Universitario ‘San José’ de Popayán durante el periodo de diciembre 2013 a diciembre 2014. Toma de muestra para análisis microbiológico: Hemocultivos: Tomados en Urgencias antes del inicio de Antibiótico EV Cultivo de bilis: Durante la cirugía, se recolectó la muestra de bilis mediante punción utilizando jeringa estéril de 10 cc con aguja Nº 21. Análisis: Análisis estadístico en programa SPSS versión 20.0 Resultados: Se estudió un total de 106 pacientes, cultivos de bilis positivos en 49,1% y hemocultivos en 19% de los pacientes. Los gérmenes más frecuentemente aislados: Escherichia coli(51.42%), Klebsiella pneumoniae(17%) y otros grampositivos. El perfil de sensibilidad para antimicrobianos de uso frecuente mostró: Sensibilidad a Ampicilina para E. Coli: 52,6%; R 26,3%; I 21%; para Ceftriaxona E. Coli: S 94,7% I 3,6% y Klebsiella: S 50% R 50 % y Sensibilidad a PPTZ E. Coli: S 84,2 %; I 5,26 % R 10,5% y Klebsiella: S 88% R 12 %. Conclusiones: La identificación de los criterios de sepsis biliar, según la clasificación de Tokyo, 2013 presenta una mayor sensibilidad y especificidad. Las enterobacterias son los microorganismo más frecuentes, principalmente la E.coli y Klebsiella P, con patrones de sensibilidad y resistencia usual comparados con la población mundial pero con una ligera tendencia al aumento en sus tasas de resistencia.