Introducción: se explora el creciente interés científico en la microbiota intestinal humana (MBIH) y su relación con diversas enfermedades crónicas no transmisibles (ECNTs). A partir de una búsqueda en PubMed, se evidencia un aumento significativo en las publicaciones sobre microbiota y microbioma gastrointestinal desde la última década. Este interés ha sido potenciado por el desarrollo de las ciencias ómicas, como la metagenómica, que permiten estudiar las características genéticas y funcionales de la MBIH sin necesidad de cultivos bacterianos. La disbiosis, o desequilibrio de la microbiota, se asocia con enfermedades como la obesidad y el sobrepeso, y se ha propuesto un modelo fisiopatológico común a las ECNTs. Dentro de este contexto, la tesis propone un nuevo marcador, el perfil Gram-González (PGG), que clasifica las bacterias de la MBIH según su tipo de tinción Gram y morfología. El PGG podría ser un indicador útil de disbiosis y estados de salud/enfermedad. Para implementar el PGG, se busca una técnica de laboratorio que permita separar y contar individualmente las bacterias en muestras fecales. Se evaluaron diversas técnicas de separación bacteriana reportadas en la literatura, como centrifugación, agitación por vortex y sonicación. El trabajo se centró en validar una combinación de técnicas propuestas por Lunau et al. (2005), adaptadas para muestras fecales, logrando resultados satisfactorios. Este estudio exploratorio establece las bases para futuros estudios clínicos que validen el PGG como herramienta diagnóstica en la evaluación de la microbiota intestinal y su impacto en la salud humana. Metodología: se centra en tres objetivos secundarios. El primero fue desarrollar el perfil Gram-González virtual (PGGv) utilizando datos metagenómicos de un estudio previo realizado con dos grupos de mujeres, uno con sobrepeso y otro delgado, sometido a hidroterapia de colon. Se extrajo el ADN bacteriano de muestras fecales y se identificaron variantes de secuencia de amplicón (ASV), luego se clasificaron usando la base de datos BacDive para establecer el PGGv. El segundo objetivo se enfocó en validar una técnica de laboratorio para separar y contar bacterias en muestras fecales. Se adoptó una combinación de técnicas que incluye agitación por vortex, sonicación y centrifugación, seguido de tinción Gram y observación microscópica. Este procedimiento fue optimizado y considerado satisfactorio, descartándose la necesidad de probar otras técnicas. El tercer objetivo implicó la creación de PGGs reales a partir de imágenes microscópicas de muestras fecales frescas. Se utilizó una cuadrícula para contar bacterias y se registraron los datos en una hoja Excel. La técnica fue validada mediante la repetición del procedimiento en días consecutivos para verificar la consistencia de los resultados, utilizando análisis de regresión lineal para evaluar la variabilidad. Este enfoque permitió obtener el primer PGG y establecer correlaciones entre las variables de los diferentes grupos bacterianos. Resultados: aquí, mostramos los resultados detallados sobre la frecuencia de diversos grupos bacterianos en muestras de materia fecal de dos grupos de mujeres adultas jóvenes: uno con sobrepeso y otro de delgadas. Se observaron cambios significativos en las proporciones bacterianas antes y después de un tratamiento de modulación de la microbiota intestinal en el grupo con sobrepeso. Los datos muestran variaciones en las relaciones de bacterias Gram-positivas y Gram-negativas, así como en las proporciones de Firmicutes a Bacteroidetes. Las figuras y tablas proporcionan una representación visual y numérica de estos cambios, destacando correlaciones importantes y diferencias en la composición bacteriana pre y post-tratamiento. Además, se realizaron análisis microscópicos de muestras fecales frescas, permitiendo la identificación y caracterización morfológica y de Gram de las bacterias presentes. Se elaboraron gráficos de dispersión y análisis estadísticos para validar la significancia de los resultados obtenidos, proporcionando una base robusta para entender las implicaciones del tratamiento en la microbiota intestinal. Discusión: los resultados iniciales del estudio muestran una alta correlación entre la razón Firmicutes/Bacteroidetes (RF/B) y la razón Gram Positivos/Gram Negativos (RG+/G-), sugiriendo que estas dos variables podrían ser utilizadas conjuntamente como biomarcadores de disbiosis y sobrepeso. Aunque los datos no son concluyentes, son prometedores y refuerzan la validez de la propuesta del Perfil Gram-González virtual (PGGv). El análisis metagenómico y la consulta en la base de datos BacDive permitieron construir los PGGvs, destacando una tendencia positiva en la mayoría de las categorías bacterianas después del tratamiento en mujeres con sobrepeso, acercándose a los valores de las mujeres delgadas. El método desarrollado, incluyendo la separación individualizada de bacterias y la obtención de PGGs de muestras frescas, demuestra ser viable y efectivo. Los gráficos radiales y de barras utilizados para representar los perfiles bacterianos permiten una clara interpretación cualitativa de los datos. A pesar de las limitaciones del tamaño de muestra y la metodología, los resultados obtenidos apoyan la hipótesis inicial y sugieren que el PGG podría ser una herramienta útil en el análisis de la microbiota intestinal humana, con potenciales aplicaciones en estudios ambientales y agrícolas. La consistencia observada en los perfiles bacterianos entre diferentes muestras refuerza la robustez del método, aunque se recomienda la validación con un mayor número de muestras y la mejora de técnicas, como el uso de microscopios de mayor aumento. Recomendaciones: dado los resultados obtenidos con los primeros ensayos, se recomienda validar el método con un número adecuado de muestras. El protocolo establecido puede ser utilizado por otros investigadores para comparar grupos de personas con diversas patologías, como sobrepeso u obesidad, contra personas delgadas y sanas. Además, este protocolo es aplicable a otras condiciones médicas, como el colon irritable y el cáncer colorrectal. El método tiene un gran potencial para analizar la composición de la microbiota en animales, suelos y muestras de agua. En animales de granja, podría mejorar la salud y el rendimiento. En suelos, proporcionaría información valiosa sobre la salud y productividad del suelo, influenciando prácticas agrícolas sostenibles. En muestras de agua, sería crucial para estudios ambientales y de calidad del agua, identificando la diversidad bacteriana en diferentes cuerpos de agua. El método es susceptible de ser mejorado. Una recomendación es el uso de un ocular de mayor aumento, como por ejemplo de 20x, lo que permitiría una asignación más precisa de cada bacteria a las categorías establecidas, aumentando así la confiabilidad de los resultados.