La Enfermedad de Chagas es causada por el protozoario Trypanosoma Cruzi es una zoonosis desatendida y endémica del continente americano. En Colombia se estima que, entre 700.000 y 1.200.000 habitantes están o han estado infectados por T. cruzi y cerca de 8.000.000 están en riesgo de infectarse, siendo Santander, el tercer departamento más afectado por esta enfermedad. Por su parte el municipio de Bucaramanga y su área metropolitana ha sido epicentro de numerosos brotes agudos de la enfermedad en algunas ocasiones asociados a la presencia de mamíferos de la especie Didelphis marsupialis, los cuales presentan comportamientos sinantrópicos y a su vez actúan como hospederos reservorios y vectores. Debido a la acción del ser humano en zonas periurbanas la biodiversidad se ve afectada, muchas veces desplazando a la fauna más sensible a estas alteraciones y propiciando la adaptación y altas poblaciones de mamíferos sinantrópicos como el D. marsupialis. Debido a su relevancia en los ciclos de transmisión de este parásito el objetivo de este trabajo fue la detección de formas parasitarias de Trypanosoma spp. en Didelphis marsupialis de Bucaramanga y su área metropolitana. Con este fin se llevó a cabo captura de D. marsupialis en 14 zonas periurbanas Bucaramanga y su área metropolitana, se recolectó información somática y se les realizó diagnóstico de infección por Trypanosoma spp. mediante hemocultivo. Se capturaron 70 animales de la especie D. marsupialis, 39 machos y 31 hembras los cuales presentaron una prevalencia del 41 %. La mayor prevalencia se presentó en hembras (52%) sin embargo, no hubo diferencia estadísticamente significativa (p=0.194). En cuando a la edad, se determinó mayor prevalencia en las fases VII (34%), no obstante, estadísticamente no hay diferencias significativas entre las fases (p=0.277) y se observó mayor prevalencia en el municipio de Girón (100%), comparado con su área metropolitana, no se identificó una diferencia estadísticamente significativa entre los municipios con la prevalencia (p= 1). Se determinó la densidad relativa mediante densidad de captura, Floridablanca 0,22 (22%), Girón 0,10 (10%), Piedecuesta 0.16 (16%) y Bucaramanga el municipio con mayor densidad relativa 0,50 (50%), la Densidad vs Ciudad no dio resultado con diferencia estadísticamente significativas (p=0.129).