Este trabajo desarrolló un método para la extracción de azucares reductores totales (ART) a partir de la microalga Chaetoceros Gracilis, para utilizarlos en una posterior etapa de fermentación en el proceso de producción de bioetanol, trabajo contemplado en el proyecto del Ministerio de Agricultura código 2008D32006-6710: Bioprospección de Microalgas Colombianas para la Producción de Biodiesel. Basado en el proceso de producción de bioetanol de segunda generación (a partir de material lignocelulósico) se sometieron las microalgas Chaetoceros Gracilis a un pretratamiento químico, en el cual, la pared celular, donde se concentra la mayor cantidad de carbohidratos, sea destruida, extrayendo así los azúcares reductores presentes. Durante el proceso la microalga se pretrató con una mezcla de etanol y H2SO4, a 121ºC y 29 psig, donde se estudiaron variables como Concentración de H2SO4 (M), concentración de Etanol (%v/v), y tiempo de pretratamiento (min) con diferentes valores; la variable de respuesta fue el porcentaje de