Potato mop-top virus (PMTV) causes an important re-emerging disease in potato crops in Colombia due to the increased incidence of its protozoan vector Spongospora subterranea f.sp. subterranea (Sss), the causing agent of Powdery scab disease. For an accurate detection of PMTV it is recommended to combine different diagnostic tests and evaluate multiple samples per plant or tissue. In order to increase the number of available tools for detection of PMTV, antibodies targeting the RT domain of the CP-RT protein were developed in this work. Sequencing of the RT domain from the colombian strain R25 was achieved and using bioinformatic analysis, a potential antigenic region was identified. A peptide mimicking the antigenic region was inoculated in rabbits for the production of polyclonal antibodies. The antibodies were tested by ELISA using Nicotiana benthamiana bait-plants infected with Sss cystosori and potato plants collected in La Union (Antioquia). The validity of serological tests was confirmed by RT-PCR. A complete sequence of the RT domain and 441 nt of the CP gene were obtained. Phylogenetic analysis identified strain R25 as closely associated to the PMTV lineage distributed worldwide. A total of 19.26 mg of anti-CP-RT polyclonal antibodies useful in detecting PMTV in infected plants were obtained. As CP-RT is involved in transmission of PMTV by Sss, these antibodies will be useful for supporting not only diagnostic programs but also basic and epidemiologic studies aimed at understanding interactions between PMTV and Sss. / El Potato mop-top virus (PMTV) es uno de los virus re-emergentes en los cultivos de papa de Colombia, como resultado del aumento de la incidencia de su vector natural, el protozoo Spongospora subterranea f.sp. subterranea (Sss), agente causal de la Sarna polvosa de la papa. Para la deteccion del virus se recomienda la realizacion simultanea de diferentes pruebas, asi como la evaluacion de multiples submuestras por tejido bajo analisis. Con el fin de ampliar el rango de herramientas para la deteccion de PMTV, se obtuvieron anticuerpos dirigidos al dominio RT de la proteina CP-RT. Se secuencio dicho dominio en el aislamiento colombiano R25 de PMTV y se realizaron analisis bioinformaticos para ubicar regiones peptidicas con alto potencial inmunogenico. El peptido seleccionado fue inoculado en conejos para obtener anticuerpos, cuya utilidad fue evaluada a partir de pruebas de ELISA indirecto en plantas senuelo de Nicotiana benthamiana inoculadas con quistosoros de Sss y en plantas de papa obtenidas en La Union (Antioquia). Estas pruebas estuvieron acompanadas con evaluaciones de RTPCR. Se obtuvo la totalidad del dominio RT, asi como 441 nt del gen CP. Los analisis filogeneticos identificaron la cepa R25 como asociada al linaje de PMTV mundialmente distribuido. Se obtuvieron 19,26 mg de anticuerpos, los que resultaron efectivos para detectar PMTV. Ya que CP-RT es responsable de la transmision del PMTV por Sss, estos anticuerpos permitiran no solo apoyar los programas de diagnostico, sino tambien estudios basicos y epidemiologicos tendientes a evaluar las interacciones del PMTV y Sss.
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Plant Virus Research Studies
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FuenteRevista Facultad Nacional de Agronomía Medellín