Antecedentes. Las enterobacterias, antaño floranormal del tracto gastrointestinal, han cambiadosu biología y emergido como agentespatógenos nosocomiales que se tornan resistentesa los antibióticos conocidos.Objetivo. Realizar la caracterizaciónepidemiológico-molecular de 20 aislamientos deEnterobacter cloacae resistentes acefalosporinas de tercera generación; provenientesde un hospital de tercer nivel de Bogotá-Colombia.Material y métodos. Los aislamientos fueronidentificados mediante sistemas automatizadosMicroscan y VITEK, se utilizó el Enterobacterasbureae como control externo inter-especie.La confirmación de resistencia se hizo por técnicade difusión en agar, y una vez establecidase realizó BLEE para comprobación. La determinaciónde puntos isoeléctricos se hizo, mediantelisis por ultrasonido y la genotipificaciónmediante la metodología para bacterias Gramnegativaspropuesta por Versalovic.Resultados: Los aislamientos colectadosdurante un año fueron causantes de 15 casos de infección Intrahospitalaria y dos colonizaciones.Todos los aislamientos presentaronresistencia a cefotaxima, ceftazidima,ceftriaxona, aztreonam y ciprofloxacina,95% a amikacina, gentamicina y cloranfenicol,75% a trimetoprim/sulfametoxazol, 20% acefepime y todos fueron sensibles a imipenem.Dos aislamientos fueron confirmados comoproductores de â-lactamasas de espectro extendido(BLEE) por la técnica microbiológicade disco combinado. Por isoelectroenfoquepresentaron dos â-lactamasas con puntosisoeléctricos (pI) de 5,4 y 8,2. En los 18 aislamientosno inhibidos por ácido clavulánico, sedetectaron entre 2 y 4 â-lactamasas con pIde 5,4; 6,0; 7,0; 8,2 y mayor que 8,2; la resistenciaa cefalosporinas de tercera generaciónpodría ser atribuida a la hiperproducción deAmpC; los valores de pI sugieren la producciónsimultánea de â-lactamasas tipo SHV yTEM. La genotipificación mediante tresmetodologías de rep-PCR (ERIC; REP yBOX) agrupó la población estudiada en sieteclones: seis constituidos por un solo aislamientoy el clon predominante E1/B1/R1 agrupó14 aislamientos causantes de infección endiez pacientes.Conclusión. Se identificó un clon deEnterobacter cloacae multirresistente, endémicoen una institución de tercer nivel enBogotá, causante de infección nosocomial yquirúrgica en particular.