Introduccion: El proposito del presente estudio fue identificar el cumplimiento de las normas de bioseguridad del personal de enfermeria en una ESE de tercer nivel de atencion, a partir de la percepcion del trabajador y la observacion del evaluador durante el 2014. Metodologia: Estudio descriptivo de diseno transversal correlacional, se utilizaron dos instrumentos: una “Guia de observacion de practica de normas de bioseguridad”, de la Universidad Central de Venezuela y una “Encuesta sobre conocimiento y uso de elementos y normas de bioseguridad” de la Fundacion Universitaria Manuela Beltran, entregada despues de haber aplicado la Guia de observacion para ser diligenciada por los trabajadores junto con el consentimiento informado. Resultados: El genero predominante femenino 84%, la edad promedio 26 anos, en su mayoria auxiliares de enfermeria con predominancia de mas de 5 anos de ejercicio laboral; respecto al programa de seguridad y salud en el trabajo fue conocido por el total de evaluados y la mayoria conoce el protocolo a seguir en caso de accidente laboral, personas que han sufrido accidentes 46%, predominando el accidente tipo pinchazo 40% seguido de cortaduras 4%; y 2% de personas con enfermedad de origen laboral; respecto al uso de elementos de proteccion personal se evidencia que los mas utilizados son los guantes 72% y protector nasobucal 62%. Conclusion: El 53,17% de los participantes cumplieron las normas de bioseguridad, pero 46,83% no presentan adherencia a estas normas, es decir, no se estaria realizando el control de factores de riesgo laborales procedentes de agentes biologicos, fisicos o quimicos, atentando contra su propia salud y seguridad de pacientes, visitantes y del medio ambiente.