Las lipasas de origen microbiano son biocatalizadores versátiles de gran potencial de aplicación a nivel industrial. El grupo de Investigación de Procesos Agroindustriales (GIPA) de la Universidad de la Sabana ha aislado, caracterizado y purificado parcialmente la lipasa LSPSA-01 de Pseudomonas aeruginosa PSA-01, la cual se ha encontrado promisoria para la catálisis de reacciones de esterificación para la producción de biodiesel desde aceite de palma y metanol 1. Esta lipasa mostró buena actividad a 58°C, tolerancia a pH alcalinos y no perdió su actividad en solventes tales como hexano, heptano, DMSO y etanol 2. Por las propiedades mencionadas y en búsqueda de mejorar los rendimientos de producción de la lipasa LSPSA-01, para su posterior purificación y caracterización bioquímica. El presente trabajo tiene por objetivo obtener la lipasa LPSA01 mediante estrategias de producción heteróloga, para evaluar su actividad y rendimientos de producción. El gen de la lipasa, lipA (936 bp) y el gen de la foldasa, lipH (867 bp) de Pseudomonas aeruginosa PSA01 se identificaron y se secuenciaron, encontrándose idénticos en un 99% y 100% con los genes de lipA y lipH, de P. aeruginosa PAO1, P. aeruginosa LST03 y P. aeruginosa CS-2, respectivamente. Se construyó exitosamente el sistema de expresión Escherichia coli SHuffle/pET29a-lipA. La actividad de lipasa obtenida con este sistema se encontró para el cultivo inducido a una densidad óptica de 0.4 Abs a 600 nm, con una concentración de IPTG de 0.4mM y temperatura de expresión 25°C, en la fracción soluble de lisis, la cual correspondió a 8000 U/L. La LipA activa se logró obtener sin la coexpresión de LipH, sin embargo, la mayor concentración de lipasa recombinante se acumula en cuerpos de inclusión inactiva.