La diabetes es una enfermedad metabólica de origen multifactorial que ha sido considerada la epidemia del siglo XXI. La mayor parte de los casos de diabetes corresponden a diabetes tipo 2, que se relacionan con obesidad y resistencia a la insulina, esta última entendida como una menor respuesta a la insulina por parte de las células y tejidos. El objetivo de este trabajo fue estandarizar y caracterizar a nivel molecular un modelo celular de resistencia a la insulina inducida farmacológicamente. Para ello se trabajó con células adiposas 3T3-L1, y se implementó un bioensayo colorimétrico para cuantificar el consumo de glucosa tanto basal como estimulado con insulina, el que sirvió de base para evaluar la resistencia inducida por diferentes fármacos. De cinco fármacos evaluados, se observó resistencia a la insulina sólo en respuesta a glucocorticoides. El tratamiento con dexametasona 10 μM por 24 y 48 horas, o con prednisolona ≥10 μM por 48 horas, disminuyó significativamente el consumo de glucosa estimulado por insulina, indicando resistencia a la insulina. El tratamiento con indinavir, olanzapina o peróxido de hidrógeno (100 μM por 24 y 48 horas) no afectó la respuesta a insulina. Interesantemente, olanzapina aumentó significativamente el consumo basal de glucosa a 24 y 48 h. La caracterización molecular de nuestro modelo se realizó a través de un análisis de proteómica cuantitativa tipo label free, el cual identificó 76 proteínas que se expresaron diferencialmente en las células con resistencia a insulina inducida por prednisolona (100 M por 48 horas) comparadas con las células control. De éstas, 56 aumentaron y 20 disminuyeron su expresión entre 1.25 y 5 veces, lo que nos permitió identificar por primera vez un grupo de proteínas cuya expresión se relacionaría con resistencia a la insulina inducida por prednisolona. Estas proteínas fueron: ACADSB, ACOT9, ATP6V1A, CKAP4, CTTN, DCAKD, EIF4A3, ESYT2, FKBP5, GSN, NMT1, PHGDH, PNPLA2, RBM14, SAMM50, SLC3A2, SRSF3, TUBA1A, SCD2, CAVIN1, ESYT1, LIPE, PKM, PLIN4, SPTBN1 y SUMO2. En conclusión, se estandarizó y caracterizó a nivel proteómico un modelo celular de resistencia a la insulina inducida con prednisolona en adipocitos 3T3-L1. Este modelo debería ser útil en la identificación de nuevas dianas moleculares implicadas en la respuesta y en la resistencia a la insulina, en la fisiopatología de la diabetes mellitus tipo 2, y en la búsqueda de nuevos fármacos.