El objetivo de este trabajo fue mejorar un metodo estandar para la purificacion de lipopolisacarido (LPS) de Porphyromonas gingivalis libre de polisacaridos usando una estrategia de extraccion, digestion enzimatica y cromatografia de alta resolucion. La bacteria P. gingivalis se cultivo en condiciones de anaerobiosis y se hizo extraccion de las membranas con el metodo de fenol-agua. Luego de una digestion enzimatica (DNAsa, RNAsa y proteasa) se separo el extracto por filtracion por gel con Sephacryl S-200. La muestra purificada se caracterizo por electroforesis en gel de acrilamida con tincion de plata y por el metodo Purpald se detecto el acido 2-ceto-3-desoxioctulosonico (KDO). Se obtuvo una preparacion libre de acidos nucleicos, proteinas y polisacaridos. La separacion por cromatografia fue de alta resolucion al permitir la obtencion de dos picos con diferentes componentes. El protocolo de purificacion nos permitio obtener LPS de P. gingivalis con alto grado de pureza, el cual podria ser usado en proximos ensayos para evaluar su funcion en ensayos in vitro e in vivo; asi como iniciar la obtencion de LPS de otras bacterias periodontopaticas, con el fin de investigar la asociacion de enfermedad periodontal con enfermedades cardiovasculares.
Tópico:
Oral microbiology and periodontitis research
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FuenteDOAJ (DOAJ: Directory of Open Access Journals)