Resumen: En este proyecto de investigacion se obtiene un biosurfactante y se evalua su uso en recobro mejorado de petroleo. El biosurfactante se produjo a partir de la fermentacion de biomasas residuales utilizando bacterias de Lactobacillus fermentum, aisladas de suero lactico de diferentes regiones de Colombia. A partir de un estudio preliminar, en el cual se examinaron 18 cepas para detectar bacterias productoras de biosurfactante, se seleccionaron tres de estos microorganismos (LAC05, LAC10 y LAC12) para llevar a cabo el proceso de obtencion del biosurfactante. Los experimentos se realizaron a 37°C, la cual fue seleccionada entre cinco temperaturas (31, 34, 37 y 40°C), como la optima para crecimiento de las bacterias acido lacticas. Para optimizar la produccion del biosurfactante se utilizo un esquema factorial (3x2x4) aleatorizado con tres replicas correspondiente a tres cepas microbianas, dos fuentes de carbon (melaza y suero) y cuatro formulaciones de medios de cultivo, en los cuales se variaron las concentraciones de nitrogeno, hierro y fosforo. La tension superficial de los medios de cultivo se selecciono como variable respuesta del diseno de experimentos. La combinacion de variables que permitio minimizar la tension superficial del medio de cultivo se obtuvo con la bacteria LAC12, la melaza y el medio M2. Al biosurfactante obtenido se le determino su concentracion critica micelar y su balance lipofilico-hidrofilico (HLB). Adicionalmente, el biosurfactante se caracterizo por medio de Espectroscopia Infrarroja por transformada de Fourier (FTIR) y Cromatografia Liquida de Alta Eficacia (HPLC: High Performance Liquid Chromatography). La factibilidad tecnica del biosurfactante para ser usado en procesos de recobro mejorado de petroleo se evaluo mediante el montaje de una prueba de desplazamiento usando un empaque de arena. El biosurfactante obtenido demostro ser efectivo en el recobro de petroleo ya que aumento en un 18% la produccion de petroleo en comparacion con el petroleo recuperado con una inyeccion convencional de agua.