El potencial anticancerígeno de la especie Chromolaena tacotana ha sido objeto de estudio en los últimos años debido a su alto contenido de flavonoides citotóxicos en hojas e inflorescencias. En esta investigación se pretende evaluar la actividad de dos chalconas presentes en las inflorescencias de la planta, cuyo potencial anticancerígeno no había sido estudiado, la 2’4-dihidroxi-4’,6’- dimetoxichalcona (CHA1) y la 2’, 3,4-trihidroxi-4’,6’-dimetoxichalcona (CHA2) sobre las líneas celulares de cáncer de colon RKO y HT-29, que difieren por el estado del gen que codifica para la proteína p53. La actividad citotóxica de los flavonoides fue evaluada mediante el ensayo MTT, en el que ambos flavonoides mostraron una actividad citotóxica con valores de IC50 inferiores a los del control positivo quercetina. Posteriormente, se identificaron cambios en los microtúbulos y núcleos de las células por medio de microscopia de fluorescencia indirecta, evidenciando pérdida de la integridad morfológica en las células. Por otra parte, se determinó que los flavonoides inducen pérdida del potencial de membrana mitocondrial evaluado cualitativamente mediante el ensayo JC-10. Finalmente, se seleccionó la línea celular más sensible a los tratamientos y en esta se identificó la activación de las caspasas -3 y -7 que son enzimas que intervienen en el proceso de muerte celular apoptótico, asimismo, se realizó la identificación de la proteína p53 que además de estar presente en condiciones normales en la célula RKO, también se relaciona con dicho proceso. Los resultados indican que tanto CHA1 como CHA2 tienen efecto antiproliferativo en las líneas celulares RKO y HT-29, el cual podría estar relacionado con el estado de la proteína p53, puesto que se evidenció mayor sensibilidad en la línea celular RKO, además, para esta línea no se presentan diferencias significativas en los valores de IC50 calculados para cada flavonoide, lo que indica que la actividad en estas células es independiente de las diferencias estructurales de las dos chalconas.