La tecnologia GMT ®(Tilapia geneticamente macho) se convierte en una alternativa viable para producir lotes monosexo machos de tilapia sin el uso de hormonas, pero como primer paso es necesario producir e identificar neohembras XY. El principal problema es identificar neohembras de hembras normales, sin necesidad de emplear pruebas de progenie que implica la produccion de multiples generaciones. El objetivo de este estudio fue producir ejemplares de neohembras de tilapia roja e identificar el genotipo de neohembras por citogenetica clasica y molecular. Se feminizaron 800 larvas de tilapia suministrando una dosis de hormona 17β-estradiol a razon de 200mg/Kg de alimento por 30 dias y un tratamiento control de 200 larvas sin hormona feminizante. A los 350g de peso se realizo sexaje manual por inspeccion de la papila urogenital y marcacion con microchip para su posterior identificacion. Los cromosomas se obtuvieron mediante la tecnica de cultivo de linfocitos de sangre periferica y se emplearon las tecnicas de bandeo cromosomico C, Q, G y NOR. Se genotipificaron los individuos de los dos tratamientos con el microsatelite UNH898, y se empleo una sonda que contenia el genotipo 260/290, especifica para machos normales en la tecnica FISH. Los resultados de los analisis mostraron que la especie Oreochromis sp., posee 2n=44 cromosomas y se encontraron patrones unicos de banda C sin evidencia de cromosomas sexuales. Se encontro un genotipo recurrente en machos, pero mediante citogenetica molecular se logro evidenciar que no es exclusivo para machos porque hibrido en dispersiones cromosomicas de hembras.