La determinación de contaminantes en alimentos es un requerimiento fundamental para garantizar la inocuidad de estos y la seguridad del consumidor. Dentro de los contaminantes de interés, los residuos de plaguicidas constituyen un caso de preocupación, debido al continuo y permanente uso en cada una de las etapas del proceso productivo de los cultivos. Dado que en el país existe un reducido número de laboratorios competentes en análisis de residuos de plaguicidas en frutas, acreditados bajo la norma NTC/ISO 17025:2017, resulta importante impulsar los procesos de acreditación de laboratorios para asegurar resultados confiables y garantizar la inocuidad de los alimentos que se consumen en el ámbito nacional y se exportan en el ámbito internacional. Una manera de realizar seguimiento a la validez de los ensayos de laboratorios es la participación en ensayos de aptitud en las que se evalúen los resultados producidos. Para alcanzar este objetivo es necesario contar con materiales de referencia perfectamente caracterizados, con cantidades conocidas del analito y propiedades bien definidas que permita realizar la comparación en las mediciones realizadas. Por lo anterior, en este trabajo se desarrolló la producción piloto de un material de referencia para análisis de residuos de plaguicidas en frutas con alto contenido de agua, como una herramienta para evaluación de laboratorios que realizan este tipo de análisis. El material se preparó empleando gulupa como matriz y 10 plaguicidas con distintas propiedades fisicoquímicas (atrazina, boscalida, carbendazim, carbofurano, clorpirifos, cimoxanilo, heptenofos, malation, metalaxilo y metazacloro). Para la caracterización del material, se desarrolló y validó un método de medición exacto y confiable basado en el procedimiento de extracción QuEChERS y análisis mediante cromatografía líquida acoplada a espectrometría de masas en tándem CL-MS/MS. Las fracciones másicas junto con las incertidumbres combinadas en el material producido para cada plaguicida fueron: atrazina 39.56 μg/kg ± 4.74 μg /kg, boscalida 30.12 μg/kg ± 2.75 μg/kg, carbendazim 88.76 μg/kg ± 9.83 μg/kg, carbofurano 28.78 μg/kg ± 3.55 μg/kg, clorpirifos 34.70 μg/kg ± 3.21 μg/kg, cimoxanilo 88.17 μg/kg ± 5.98 μg/kg, heptenofos 76.15 μg/kg ± 9.04 μg/kg, malation 31.11 μg/kg ± 3.42 μg/kg, metalaxilo 153.10 μg/kg ± 16.91 μg/kg; metazacloro 19.72 μg/kg ± 2.43 μg/kg. Para evaluar la idoneidad del material de referencia se realizaron estudios sobre la homogeneidad y la estabilidad de los plaguicidas en la matriz. Los resultados indicaron que la contribución de la heterogeneidad de los plaguicidas en las muestras sobre la incertidumbre se encuentra entre 3.10 % y 6.73 %. En cuanto al estudio de estabilidad, se empleó un diseño isócrono, se evaluaron 3 temperaturas durante 79 días (18 °C, 4 °C, -20 °C y -80 °C como temperatura de referencia). Los resultados indicaron que no se presentó degradación de ningún analito a -20 °C durante el periodo de tiempo evaluado, lo que sugiere que a esta temperatura debe transportarse y almacenarse el MR antes y durante su participación en ensayos de intercomparación. La contribución a la incertidumbre por estabilidad de los plaguicidas en la matriz se encuentra entre 2.33 % y 6.63 %. Como resultado final de la producción piloto se obtuvo un protocolo de preparación del material de referencia, el cual incluye los detalles que deben considerarse para asegurar la homogeneidad y estabilidad del mismo. Estos resultados constituyen una buena base para el desarrollo de un material de referencia certificado para análisis de residuos de plaguicidas en matriz. Palabras clave: material de referencia, ítem de ensayo, caracterización del material de referencia, estudios de homogeneidad y estabilidad, CL-MS/MS.