Galacto-oligosacaridos (GOS) son prebioticos que se utilizan en las formulaciones de alimentos funcionales. Estos compuestos se producen durante la hidrolisis de lactosa por b-galactosidasa. En este estudio se evaluo la produccion de GOS usando lactosa y lactosuero deshidratado (lactosuero) con la enzima Lactozym 6500 L libre e inmovilizada. La sintesis se realizo a 30, 40 y 50 ° C, pH 5.5, 6.0 y 6.5, concentracion de lactosa 300, 400 y 500 g L-1, y relacion en peso enzima / lactosa de 1.00, 1.25 y 1.50. La b-galactosidasa se inmovilizo por atrapamiento en alginato de calcio y union covalente en silica gel 60. Ambas enzimas inmovilizadas se caracterizaron con o-nitrofenol-b-D-galactopiranosido (ONPG), antes de la produccion de GOS para determinar la retencion de la actividad. El rendimiento de produccion de GOS obtenidos para la enzima libre fue de 32,7% y 24,5% con lactosa y lactosuero, respectivamente. La inmovilizacion sobre silica gel tratada mostro una retencion de actividad enzimatica del 41,8%, en comparacion con la tecnica de atrapamiento con solo el 18,4%.