La -sinucleina es el componente principal de los cuerpos de Lewy y un sello patogenico de todas las sinucleinopatias, en personas con alto consumo de alcohol, se han observado cambios importantes en la expresion de α sinucleina, alterando la neuroproteccion. Las mutaciones en el gen -sinucleina y su correspondiente produccion de proteina mutada han sido asociadas con procesos de agregacion de la proteina, en donde se ve alterada su conformacion y adquiriere capacidad autoagregante, lo que se relaciona con el deposito de agregados proteinaceos en las neuronas y podria constituir un factor fisiopatologico importante en enfermedades neuronales. Dentro de las mutaciones identificadas, una mutacion importante G51D en el gen de la -sinucleina sugirio que la -sinucleina podria servir como marcador anatomopatologico para enfermedades neuronales, y de adicciones relacionadas con el abuso de alcohol. En este proyecto presentamos la metodologia que nos permitio establecer las mejores condiciones de expresion, purificacion y caracterizacion de la proteina recombinante α-sinucleina G51D, con ensayos de agragacion y la estandarizaron de las condiciones para la obtencion del anticuerpo de tipo policlonal dirigido hacia el antigeno α-sinucleina G51D; para lograr lo anterior se identifico por medio de estudios bioinformaticos un candidato mutante de la proteina α-sinucleina, que en nuestro caso resulto en un cambio en el aminoacido 51 de la proteina, siendo reemplazada la Glicina por Acido aspartico; se realizo la optimizacion para la clonacion del gen de estudio, utilizando el vector pET30a, que nos dio la mejor solubilidad in silico, y la proteina obtenida permitio la obtencion de un anticuerpo policlonal anti proteina mutada α-sinucleina G51D, constituyendo una herramienta inmunologica importante en la confirmacion de la existencia de proteinas mutantes a nivel de la α-sinucleina.
