En este trabajo, se diseñaron con ayuda de herramientas bioinformáticas cuatro secuencias análogas a la catelicidina humana LL-37, (LL37-1, LL37-2, LL37-3 y LL37-4) con el fin de probar su actividad anti-biopelícula en aislamientos clínicos de Staphylococcus spp, caracterizadas genotípica (identificación de los genes operón IcaRADBC) y fenotípicamente (formación de biopelícula y perfil de resistencia). Los péptidos fueron sintetizados usando la estrategia de Fmoc, se purificaron por RP-HPLC y se caracterizaron por espectrometría de masas MALDI-TOF MS. Los ensayos in vitro de la actividad antibiopelícula por cabina de flujo continuo celular muestran que una concentración de 5 µM fue suficiente para inhibir la formación de biopelícula de Staphylococcus spp; mientras que, en ensayos estáticos por cristal violeta se necesitó una concentración entre 25-50 µM. Además se evaluó el posible efecto deletreo de las secuencias peptídicas mediante la liberación de la enzima Lactato Deshidrogenasa (LDH) en células humanas y su actividad hemolítica. Según los resultados de citotoxicidad, a una concentración de 6,125 µM se presentó un nulo efecto hemolítico, incluso a concentraciones elevadas de (100 µM) y un bajo porcentaje de citotoxicidad (menor al 10%) en PBMCs. Por lo anterior, el uso de péptidos análogos de la catelicidina representa una alternativa promisoria para tratar infecciones asociadas a la biopelícula.