Introduccion: El sistema Rh esta compuesto por mas de 56 antigenos capaces de producir enfermedad hemolitica, definidos por metodos serologicos. Los mas importantes y, por ello denominados antigenos mayores del sistema, son los antigenos D, C, c, E y e. Estos antigenos se ubican sobre dos proteinas que se expresan en la membrana de los eritrocitos Rh D y Rh CE . Objetivo: Determinar la frecuencia de los antigenos C, c, E y e del sistema Rh en donantes de sangre Rh negativos del Hemocentro Centro Oriente Colombiano. Metodologia: Estudio descriptivo de corte transversal que incluyo 193 donantes voluntarios de sangre del Hemocentro Centro Oriente Colombiano, la fenotipificacion de los antigenos del sistema Rh se realizo utilizando la tecnica en tarjeta gel. Se calculo la frecuencia fenotipica de los antigenos del sistema Rh, en porcentajes y para el procesamiento de la informacion se utilizo el paquete estadistico SPSS version 21.0 donde se realizo el analisis de los datos de la poblacion. Como criterios de inclusion ser donante voluntario de sangre y de exclusion, estar hemoclasificado como antigeno DEL, D debil y D parcial. Resultados: Las muestras analizadas fueron obtenidas de la tubuladura central de la unidad fraccionada de globulos rojos, identificandose tres fenotipos con la siguiente frecuencia: cde/cde (95.86 %), cde/cdE (3.10 %) y cde/Cde (1.04 %). Los participantes del estudio provenian de diversos municipios del departamento de Boyaca y otras regiones del pais como llanos Orientales, Santander y Cundinamarca. Los antigenos del sistema Rh son altamente polimorficos a nivel de poblaciones, dada la importancia inmunologica de los antigenos del sistema Rh, los cuales se ven directamente relacionados con el desarrollo de anemia hemolitica postransfusional y perinatal, la fenotipificacion ampliada brinda mayor seguridad transfusional y seguimiento al estado del feto o neonato.