Se recolectaron muestras de hojas, tallo y raiz de cultivos de cana provenientes del municipio de Supia (Caldas). Las colonias presuntivas del genero Gluconacetobacter fueron repicadas en agar papa dextrosa para realizacion de pruebas bioquimicas. Se evaluaron los siguientes parametros bioquimicos: coloracion de Gram, fermentacion de carbohidratos, catalasa, licuefaccion de gelatina, movilidad y utilizacion de citrato. Como resultados del presente trabajo se demostro la presencia de Gluconacetobacter spp. en cultivos caldenses de cana de azucar. Asimismo, se estandarizaron metodologias para el aislamiento de bacterias fijadoras de nitrogeno como G. diazotrophicus. Lo anterior permitira explorar el potencial de este tipo de microorganismos con miras a desarrollar productos microbianos innovadores y adaptados a las condiciones ambientales locales para la promocion del crecimiento de diferentes cultivos de importancia economica en Colombia.