El objetivo de este estudio fue evaluar el efecto del diluyente INRA 82 modificado con el crioprotector glicerol (GLY) y el INRA 82 modificado con dimetilformamida (DMF) en la viabilidad de las células espermáticas de asnos criollos colombianos posdescongelación. Se recolectó el eyaculado de cinco asnos criollos colombianos, el semen sin gel se diluyó 1:1 con el diluyente INRA 82 modificado, se centrifugó a 3500 rpm. Eliminado el plasma seminal, el semen se resuspendió con el diluyente de congelación correspondiente (5% de glicerol y 5% de dimetilformamida) y se empacó en pajillas de 0,5 ml en una concentración de 150 millones de espermatozoides/ml. Las pajillas se enfriaron durante 145 minutos a cinco grados centígrados, luego se expusieron a vapores de nitrógeno líquido por un periodo 15 minutos y se sumergieron en el nitrógeno líquido. La descongelación de las pajillas se realizó a 37 grados centígrados durante 30 segundos. Las características del semen en fresco se evaluaron mediante microscopia óptica y posdescongelación mediante el sistema CASA. Los valores del semen en fresco en promedio fueron; volumen del eyaculado 60 ± 6,3, motilidad total 71 ± 9,6, motilidad progresiva 66 ± 9,6 vigor 3,0 ± 0,0 en la primera dilución los valores fueron los siguientes; con. INRA 82 modificado con glicerol la motilidad total 71 ± 13,0 motilidad progresiva 67 ± 7,0 y el vigor 3,0 ± 0,0 con INRA 82 modificado con dimetilformamida la motilidad total 70 ± 6,0, motilidad progresiva 66 ± 8,0, vigor 3,0 ± 0,0. En la evaluación posdescongelación no se observaron diferencias estadísticas significativas (P>0,05) en la motilidad total (42,6 vs 47,4), motilidad progresiva (18,8 vs 17,0), viabilidad (51,8 vs 48,1) respectivamente entre glicerol y dimetilformamida cuando se utiliza el medio INRA como diluyente. Los resultados obtenidos indican que el diluyente INRA82 modificado y los crioprotectores dimetilformamida y glicerol se pueden utilizar en la criopreservación de semen de asnos criollos colombianos