La candidiasis son un grupo de infecciones oportunistas causadas por levaduras del genero Candida . Existen diferentes especies involucradas en este tipo de micosis, siendo de mayor prevalencia en infecciones superficiales y profundas la especie Candida albicans . Sin embargo, en la ultima decada se ha visto un aumento progresivo de Candidiasis causadas por diversas especies de Candida no albicans. Actualmente la clinica de la Candidiasis se fundamenta en metodos de microbiologia tradicional, los cuales dependen del tiempo de replicacion del microorganismo, asi como de la calidad de la muestra colectada, este tipo de aproximacion tiene inconvenientes de sensibilidad y de oportunidad en el tiempo de identificacion, para contribuir a la busqueda de metodos que permitan un diagnostico rapido y especifico de infecciones fungicas de multiple etiologia, en la ultima decada se ha recurrido a metodos moleculares basados en la amplificacion simultanea y masiva de secuencias de DNA en el PCR MULTIPLEX. En este estudio, se realizo el diseno de una PCR Multiplex, para la identificacion en una unica reaccion las 5 especies de Candida ( Candida albicans- Candida parasilopsis- Candida Krusei- Candida tropicalis- Candida guillermondii ) de mayor importancia a nivel clinico. Para el diseno de las secuencias cebadoras fueron tomados como blancos los siguientes genes: ITS2 (Region transcrita interna) para Candida albicans y TOPII (Topoisomerasa II) para Candida krusei , Candida guillermondii, Candida tropicalis, Candida parasilopsis. Las cepas utilizadas para los ensayos in vitro fueron seleccionadas a partir de 50 cultivos procedentes de pacientes con micosis superficiales y profundas, identificados como positivo para Candida spp, los cuales para su identificacion fenotipica fue utilizado el Sistema Automatizado para Microbiologia de BD (Becton Dickinson) Phoenix™, como controles fueron usados cepas ATCC. El analisis mediante gel de agarosa al 1,8 % evidenciaron el siguiente perfil electroforetico: Candida albicans (206 pb), C. guillermondii (244 pb), C. tropicalis (474 pb), C. parasilopsis (558 pb); en conclusion podemos afirmar que el ensayo de PCR Multiplex disenado resulto favorable para todas las secuencias blanco, con una adecuada resolucion de bandas en geles de agarosa.