Objetivo: Implementar una tecnica de PCR (Reaccion en cadena de la polimerasa) para la deteccion de Chlamydia trachomatis . Materiales y Metodos: Se realizo un estudio experimental en el que se estandarizaron las condiciones de PCR (Concentracion de MgCl 2 , Taq polimerasa y temperatura de alineamiento de cebadores) para la amplificacion de una region de 201pb del plasmido de C. trachomati s con los cebadores CtP1 5´-TAGTAACTGCCACTTCATCA-3´ y CtP2 5´- TTCCCCTTGTAATTCGTTGC-3. Se realizaron diluciones seriadas del ADN de C. trachomatis ATCC VR885D para determinar la sensibilidad analitica. La especificidad analitica de los cebadores se determino con ADN de diferentes microorganismos patogenos y comensales del tracto urogenital. Se determino la variabilidad intra e interensayo de la PCR sobre triplicados de diferentes muestras de ADN. Resultados: Las condiciones de amplificacion fueron 94°C/4 min, seguido de 40 ciclos a 94°C/1 min, 56°C/1 min y 72°C/1.5 min y extension final de 72°C/4 min. La concentracion optima de MgCl 2 fue 1.5 mM y de ADN polimerasa 1U. La sensibilidad analitica de la prueba fue 4.8 x10 -15 g/mL de ADN equivalentes a 160 cuerpos elementales de C. trachomatis . La especificidad analitica fue 100% y la variabilidad intra e interensayo mostraron reproducibilidad de la PCR. Conclusiones: Los datos sugieren que esta PCR puede emplearse con fines diagnosticos . S e requieren estudios adicionales para la evaluacion clinica de esta prueba.
Tópico:
Reproductive tract infections research
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FuenteDOAJ (DOAJ: Directory of Open Access Journals)