Introduccion: un rapido y sensible metodo de cromatografia liquida de alta resolucion con detector de arreglo de diodo fue desarrollado y validado para la determinacion rutinaria de cefalotina sodica libre en plasma. La etapa de preparacion se basa en la precipitacion de proteinas de plasma con acetonitrilo seguido de la evaporacion del sobrenadante, la muestra se reconstituyo con fase movil antes de la inyeccion. Esta metodologia validada fue utilizada en el laboratorio para monitorizacion de la droga en pacientes postoperatorio. Objetivo: disenar y validar un metodo de cromatografia liquida de alta resolucion para cuantificar cefalotina sodicaen plasma humano. Metodos: el desarrollo y validacion se llevo a cabo empleando una columna RP-18 de 150 × 4,6 mm, 5 µm; fase movil: tampon fosfato pH 5,0 y acetonitrilo (75:25); flujo: 1,5 mL/min y un detector de arreglo de diodo a una longitud de onda de 280 nm y temperatura de 25 ° C. Se calcularon los limites de deteccion y cuantificacion y se evaluaron las posibles interferencias. Resultados: como mejor agente precipitante de las proteinas extrayente de la cefalotina sodica en plasma fue el acetonitrilo con un volumen de carga de 6 % como maximo. El metodo fue lineal (r= 0,9989), exacto (porcentaje de recuperacion de 97,6 % ± 0,8, preciso (RSD< 15,0 %), sensible y robusto al variar las condiciones analiticas. Conclusiones: el metodo desarrollado y validado resulto lineal, preciso y exacto en el intervalo de concentraciones analizado (5 hasta 500 µg/mL), lo que permitio la determinacion la cefalotina sodica en plasma sanguineo. Palabras clave: cefalotina sodica; plasma; cromatografia liquida de alta resolucion; validacion.