Entre los agentes contagiosos que inducen mastitis severas en vacas, se encuentra el Staphylococcus aureus (S. aureus), de dificil curacion clinica y alta resistencia a antimicrobianos. Debido a que el cultivo microbiologico de las muestras clinicas, solo es capaz de detectar alrededor del 50% de los casos positivos (Koskinen et al., 2009), el diagnostico por reaccion de la polimerasa en cadena (PCR) ofrece una posible alternativa. El objetivo de esta investigacion fue contribuir a la estandarizacion de un diagnostico rapido a partir de PCR para detectar S. aureus en leche de vacas afectadas por mastitis. Los resultados demostraron que con los siguientes fragmentos de nucleotidos empleados como cebadores: F 5' AGC TGT GGA TTG TCC TTT GG 3' y R 5' TCG CTC GCT CAC CTT AGA A 3', se obtenian secuencias amplificadas de 499 pb, que si bien no serian adecuadas para el diagnostico de muestras clinicas por tener una especificidad del 63%, detectaron S. aureus en 12 de 13 muestras positivas por cultivo microbiologico, lo que indica una alta sensibilidad. En conclusion, se requiere buscar nuevos cebadores que amplifiquen regiones del S. aureus que no sean compartidas con otras bacterias, en especial aquellas que producen mastitis en vacas de leche.