En el presente trabajo se determinaron las condiciones optimas de tiempo de exposicion, altura y numero de cajas de Petri necesarias para realizar un analisis microbiologico de ambientes por el metodo de sedimentacion por gravedad, realizando ensayos en diferentes instalaciones de la Universidad Tecnologica de Pereira. Para lo cual se obtuvo que el tiempo de exposicion de los medios de cultivo al ambiente sea de 30 minutos; ubicando las cajas de Petri a una altura media, generalmente mesones de trabajo; y estableciendo 5 cajas por agar, distribuidas estrategicamente en toda el area a muestrear. Se utilizaron diferentes medios de cultivo selectivos y diferenciales, con el fin de observar si se presentaba algun tipo de crecimiento siguiendo el metodo de sedimentacion por gravedad, ya que estos agares no son usados comunmente para un muestreo de ambientes. Y asi se determinaron los microorganismos y medios de cultivo a tener en cuenta en el protocolo, los cuales son: Escherichia coli, Shiguella spp, Salmonella spp, que crecen en el medio EMB; Pseudomonas aeruginosa, que presenta crecimiento en el medio Cetrimide; y Staphylococcus aureus, que se desarrolla en el medio Baird Parker. Adicionalmente, se utilizaron dos medios de cultivo indicadores de contaminacion microbiana como lo son el agar Plate Count para aerobios mesofilos y Ogye para hongos y levaduras. Finalmente con las condiciones establecidas anteriormente, se elaboro el PROTOCOLO DE MUESTREO MICROBIOLOGICO DE AMBIENTES POR EL METODO DE SEDIMENTACION PARA LA IDENTIFICACION DE: Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Salmonella spp y Shigella spp MEDIANTE LOS KITS MICROBIOLOGICOS RapID ONE y Staphylase test de Remel, y se realizaron muestreos en lugares que normalmente solicitan un analisis de ambientes al Laboratorio de Analisis de Aguas y alimentos de la UTP, con el objetivo de identificar los microorganismos mencionados. Dentro de los sitios muestreados estan un quirofano, una sala de recuperacion, una sala de espera, una cocina industrial, un restaurante y una biblioteca, evidenciando la presencia de microorganismos como: Citrobacter freundii, Acinetobacter calcoaceticus, Moellerella wisconsensis, Shigella spp y Staphylococcus aureus. A pesar de que no se encontraron todos los microorganismos establecidos en el protocolo, no se puede afirmar que estos no estan presentes en el ambiente.