Introduccion: Siparuna sessiliflora Kunth A. DC. es una especie vegetal comunmente conocida en Colombia como limoncillo, utilizada por parte de varias comunidades indigenas para tratar diferentes problemas de salud. A pesar de contar con diversos registros de usos etnobotanicos, esta especie ha sido poco estudiada desde el punto de vista fitoquimico o de su actividad biologica. Objetivos: evaluar la actividad antibacteriana de los extractos y las fracciones obtenidos a partir de las hojas de Siparuna sessiliflora sobre Bacillus subtilis, Staphylococcus aureus, Escherichia coli y Pseudomonas aeruginosa. Metodos: el material vegetal fue extraido por maceracion en frio con eter de petroleo y etanol 96 %; estos extractos se fraccionaron por metodos cromatograficos y particion liquido/liquido; su actividad antibacteriana se evaluo por el metodo de difusion en gel por perforacion en placa. Posteriormente, se identificaron los principales compuestos responsables de la bioactividad por medio de cromatografia de gases acolada a espectrometria de masas. Resultados: se encontro que las fracciones de alcaloides Alk 1 y Alk 2 presentaron actividad frente a B. subtilis, S. aureus y E. coli. Adicionalmente, la subfraccion Alk 2A fue la mas activa frente a B. subtilis. Se identificaron sobre todo alcaloides isoquinolinicos y un derivado del acido cinamico como posibles compuestos responsables de la bioactividad. Conclusiones: se reporto la actividad antibacteriana de S. sessiliflora frente a bacterias grampositivas y gramnegativas, y se genero nuevo conocimiento sobre su fitoquimica que corrobora su uso tradicional en la cura de cuadros infecciosos.