Resumen Introduccion: Las particulas en suspension PM2.5 son capaces de penetrar profundamente en el pulmon y se componen de mezclas quimicas complejas, incluyendo mutagenos y carcinogenos como los hidrocarburos aromaticos policiclicos (HAPs); la inhalacion de altas concentraciones de particulas en suspension (PM2.5) causa enfermedades respiratorias, cardiacas y pulmonares. Objetivo: Identificar los contaminantes prioritarios y estudiar mediante el ensayo cometa, la actividad genotoxica del material particulado fraccion respirable PM2.5 del aire del municipio de Villa del Rosario-Norte de Santander. Materiales y metodos: Las muestras del aire (PM2.5) de Villa del Rosario, fueron recolectadas con un muestreador Partisol 2025 plus utilizando filtros pallflex mediante muestreos por 24 horas con una frecuencia de tres dias. La materia organica de los filtros de PM2.5 fue extraida por ultrasonido con diclorometano obteniendose el extracto global. Este se separo en tres fracciones por cromatografia en columna de gel (CPG) de silice utilizando n -hexano, n-hexano-diclorometano y diclorometano, como los eluyentes correspondientes. Los hidrocarburos aromaticos policiclicos (HAPs) de cada fraccion se determinaron por cromatografia de gases con detector de ionizacion en llama (FID). Resultados: Por primera vez se reporta actividad genotoxica evaluada con el ensayo cometa, asociada con el PM2.5 del aire del municipio de Villa del Rosario y se identifican los contaminantes prioritarios extraidos con diclorometano, presentes en la materia organica de una via vehicular en Villa del Rosario, Norte de Santander. Conclusion: Los contaminantes prioritarios encontrados en el aire de Villa del Rosario son: Benzo(a) pireno, Naftaleno, Benzo(a) antraceno, Criseno, Benzo(b)fluoranteno, Benzo(k)fluoranteno y Dibenzo(a,h) antraceno, contaminantes altamente peligrosos por presentar actividad mutagenica y genotoxica. Abstract Introduction: The suspended particles PM2.5 are able to penetrate deep into the lung and consist of complex chemical mixtures, including mutagens and carcinogens such as polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs). The inhalation of high concentrations of particulate matter (PM2.5) causes respiratory, heart and lung diseases. Objective: To identify priority pollutants and study the genotoxic activity of breathable particulate matter PM2.5 air by the comet assay in the municipality of Villa del Rosario-Norte de Santander. Materials and methods: The air samples (PM2.5) of Villa del Rosario were collected with 2025 Partisol plus sampler by using filters pallflex through sampling for 24 hours with a frequency of three days. The organic matter of the PM2.5 filters was extracted by ultrasound with dichloromethane to obtain the overall extract. This was separated into three fractions by gel column chromatography (GPC) of silica using n-hexane, n-hexane-dichloromethane and dichloromethane as the corresponding eluents. The polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs) of each fraction were determined by gas chromatography with flame ionization detector (FID). Results: For the first time genotoxic activity assessed by the comet assay is reported, associated with the PM2.5 air in the municipality of Villa del Rosario and the priority pollutants extracted with dichloromethane were identified, which were present in the organic matter in a vehicular route in Villa del Rosario, Norte de Santander. Conclusion: The priority pollutants found in the air of Villa del Rosario are: Benzo (a) pyrene, Naphthalene, Benzo (a) anthracene, chrysene Benzo (b) fluoranthene, benzo (k) fluoranthene and dibenzo (a, h) anthracene, which are highly hazardous pollutants to present mutagenic and genotoxic activity.