La papa criolla (Solanum phureja Juz. et Buk) es un importante recurso genetico colombiano. Fue excluida del Tratado Internacional sobre los Recursos Fitogeneticos de la FAO, y siendo Colombia el principal pais que la explota comercialmente y que ha desarrollado un cultivar mejorado tradicionalmente conocido como “Yema de Huevo”, las posibilidades de explotacion de este recurso son importantes. Este cultivar presenta problemas de enfermedades y plagas, en particular es atacado por Tecia solanivora y Premnotrypes vorax llegando a afectar hasta el 50% del cultivo; no se han registrado genes de resistencia al insecto en el pool genetico de la especie, por lo que la aplicacion de estrategias de ingenieria genetica podria mejorar la resistencia a plagas. El proposito de este trabajo fue investigar las condiciones para el establecimiento in vitro, micropropagacion y regeneracion de papa criolla, y establecer una serie de parametros criticos para la transformacion genetica de Solanum phureja mediada por Agrobacterium tumefaciens. Con este proposito, se utilizo un vector de transformacion con el plasmido pNOV022 conteniendo una construccion quimerica con los genes mirl2 (codifica para un inhibidor de proteasas) y pmi (codifica para fosfomanosa isomerasa). La introduccion in vitro de material de papa criolla cultivado en invernadero fue efectiva mediante el uso de alcohol al 70% por un minuto e hipoclorito de sodio al 1,4% por diez minutos. Utilizando el medio de regeneracion desarrollado por el Centro Internacional de la Papa se estandarizo un medio de regeneracion para explantes de entrenudos (MS + 2 mg/l ZR + 0,02 mg/l AG3 + 0,02 mg/l ANA), obteniendose 46% de regeneracion en explantes cultivados en frascos con tapones de gasa-algodon; la diferenciacion de brotes se inicio hacia la quinta semana, pero su mayor produccion fue entre la decima y doceava semana. Las condiciones de cocultivo con A. tumefaciens estandarizadas en el presente estudio, incluyen, cocultivo liquido de 30 minutos con dilucion 1:50 y la posterior siembra de los explantes en medio de regeneracion con adicion de cefatoxina (250 mg/l). En estas condiciones, se obtuvieron regenerantes potencialmente transformados, y mediante la aplicacion de la tecnica de PCR se determino que ninguno era transgenico. El presente estudio se desarrollo con financiacion de la Universidad Nacional de Colombia y CEVIPAPA (CV-03-005-02).