La caracterizacion molecular de la infeccion causada por Agrobacterium tumefaciensy el des-cubrimiento de que una parte del plasmido inductor de tumores (T-DNA) es transferido algenoma de las plantas que infecta, han permitido utilizar esta bacteria como sistema detransformacion vegetal. La utilizacion de esta tecnologia ha permitido a los cientificos resolverproblemas con relacion a especies cultivables. En el presente trabajo se realizo la transfor-macion de las cepas LBA4404 de Agrobacterium tumefaciensy DH5a de Escherichia coli. Para tal finse utilizo la tecnica de choque termico incorporando el vector binario pNOV022, que contenia6868Resumenes la construccion p35S-IP-t35S - pUBQ-PMI-tNos (promotor 35S del CaMV, inhibidor de protea-sas, terminador 35S del CaMV, promotor ubiquitina 3, fosfomanosa isomerasa y terminadorde la nopalinsintetasa). Igualmente se realizo seleccion de clones bacterianos transformados(basado en la resistencia a espectinomicina y/o estreptomicina) y su caracterizacion molecularpor medio de PCR y un perfil de restriccion. Este trabajo apunto a producir un vector adecuadopara la transformacion estable de papa criolla (Solanum phureja) y de papa (Solanum tuberosum),un gen que confiere resistencia a insectos. Los resultados de las metodologias empleados evi-denciaron la introduccion exitosa del plasmido recombinante en E. coliy A. tumefaciens. Si bienla eficiencia de transformacion fue baja (0,032 x 10-8), los resultados de la PCR mostraron laamplificacion de una secuencia de 500 pb del gen inhibidor de proteasa aislado a partir de lascepas transformadas. En cuanto al perfil de restriccion los resultados no fueron los esperados,sin embargo, permiten diferenciar la cepa de A. tumefacienstransformada. Adicionalmente seestandarizo las condiciones de los medios de seleccion para diferenciar cepas transformadas.
Tópico:
Plant tissue culture and regeneration
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FuenteDOAJ (DOAJ: Directory of Open Access Journals)