El glifosato es un herbicida no selectivo,ampliamente utilizado en el mundo para controlar malezas anuales y perennes. Su principal metabolito en suelos y aguas es el acido aminometilfosfonico (AMPA) formado por la accion de microorganismos. Este herbicida se utiliza en Colombia en altas dosis para la erradicacion de cultivos ilicitos de coca y amapola, y como madurante en cana de azucar, constituyendo un problema ambiental y social en el pais, y haciendose necesaria la evaluacion de residuos de glifosato y su metabolito en diferentes matrices. En este trabajo se valido una metodologia analitica para determinar residuos de glifosato y de su metabolito AMPA en aguas de influencia de algunas regiones colombianas. El procedimiento experimental comprende dos pasos principales: el primero es un paso de limpieza, extraccion y concentracion en fase solida; el Segundo corresponde a la separacion, identificacion y cuantificacion de los compuestos mediante Cromatografia Liquida de Alta Eficiencia (CLAE) con derivacion poscolumna y deteccion por fluorescencia. Los resultados de la validacion muestran que la metodologia es especifica, selectiva, precisa y robusta en un rango lineal entre 10 y 750 /xg/L, con limites de deteccion de 0,8 /xg/L y limites de cuantificacion de 2 /ig/L para los dos analitos. Las recuperaciones se encuentran en el orden del 73% para glifosato y del 70% para el AMPA. Ademas, se muestran los resultados de analisis de aguas tomadas en algunas zonas del pais donde se aplica glifosato en diferentes dosis con diferentes propositos, encontrandose residuos del herbicida y de su metabolito en concentraciones por encima de los valores permitidos en aguas potables para plaguicidas de categoria toxicologica IV, caso del glifosato, de acuerdo con la legislacion colombiana