Abstract. Phytases are enzymes used as feed additive that enhance the phosphorus and mineral uptake in monogastric animals and reduce the level of phosphate excretion in their manure. Due to their easy cultivation and high production of extracellular enzymes, filamentous fungi are one of best sources of phytase for use in the feed industry. Phytase has been found principally in the genera Aspergillus, Penicillium, Mucor and Rhizopus. In this work, we report the isolation and characterization of environmental fungi producers of phytase with potential use as feed additives. Samples were collected from soils, fruits and cereals in Antioquia (Colombia). A total of 26 fungal strains were isolated and identified using ITS sequencing and morphological analysis. Strains belonged to the following genera: Penicillium, Aspergillus, Fusarium, Mortierella, Pestalotiopsis, Phoma, Paecilomyces and Rigidoporus. Fifty percent of isolates exhibited halos in phytase screening agar indicating that acidic phytases are common enzymes secreted by environmental fungi. Ten isolates were also able to grow in liquid phytase screening medium revealing their potential use for enzyme production in submerged fermentations. Molecular detection of the PhyA gene from Aspergillus was achieved. Partial sequence of the phyA gene from one A. niger isolate was obtained and analyzed. / Resumen. Las fitasas son enzimas utilizadas como aditivo en productos de alimentacion animal, con el fin de mejorar la asimilacion de fosforo y minerales en animales monogastricos y disminuir la excrecion de fosforo al ambiente. Los hongos filamentosos son una de las mejores fuentes de fitasas debido a su facilidad de cultivo y altos niveles de produccion de enzimas extracelulares. Los principales productores de fitasas corresponden a miembros de los generos Aspergillus, Penicillium, Mucor y Rhizopus. En este trabajo se reporta el aislamiento y caracterizacion de hongos ambientales productores de fitasas con aplicacion potencial en la industria de alimentacion animal. Se obtuvieron e identificaron un total de 26 aislamientos; caracterizados por secuenciacion de la region ITS-ADNr y analisis morfologico. Los aislamientos pertenecieron a los siguientes generos: Penicillium, Aspergillus, Fusarium, Mortierella, Pestalotiopsis, Phoma, Paecilomyces y Rigidoporus. Se observo la secrecion de fitasas en 50% de los aislamientos sugiriendo la ubiquidad de esta enzima en hongos ambientales. Diez aislamientos crecieron eficientemente en medio liquido con fitato como unica fuente de fosforo. Estos ultimos cumplen con los requisitos para la produccion de enzimas mediante fermentacion sumergida. Se disenaron cebadores para la deteccion molecular del gen PhyA en los aislamientos del genero Aspergillus. Se obtuvo y analizo la secuencia parcial del gen PhyA de un aislamiento de A. niger