Este estudio reporta la purificacion y determinacion de carbohidratos en la vici- lina de Canavalia ensiformis ( Jack bean). La vicilina se purifico por precipitacion isoelectrica a pH 6,4 y 4,8, cromatografia de intercambio ionico (DEAE-Sephadex A-50) y cromatografia de afinidad (Con A -Sepharosa 4B). La pureza de la proteina se verifico por SDS-PAGE y su identidad se confirmo por espectrometria de masas empleando la tecnica de ionizacion MALDI (desorcion-ionizacion con laser asis- tida por una matriz) en un espectrometro de tiempo de vuelo (ToF) obteniendose un espectro de masas caracteristico de la proteina (PMF) (MALDI-ToF-PMF). La oxidacion de residuos glicosidicos en la vicilina demostro la presencia de carbo- hidratos en la proteina, lo cual se corroboro por deglicosilacion enzimatica con Peptido N-glicosidasa F (PNGasa F) y por el metodo de Dubois, el cual mostro un contenido de carbohidratos del 4,03% en la proteina. Estos resultados muestran, por primera vez, la presencia de glicosidos en la vicilina de Canavalia ensiformis. El proceso de purificacion de la vicilina de la semilla de Canavalia ensiformis, desarrollado en este trabajo, permitio obtener la proteina con un grado de pureza muy superior al descrito previamente en la literatura.
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Enzyme Production and Characterization
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FuenteRevista Colombiana de Ciencias Químico-Farmacéuticas