Los miembros del genero Leishmania son parasitos intracelulares obligados, responsables de numerosas enfermedades humanas. Cumplen una parte muy importante de su ciclo de vida dentro del mamifero hospedero, en donde despues de la fagocitosis por los macrofagos, los parasitos son confinados dentro de un compartimiento endolisosomal denominado vacuola parasitofora (VP), en el cual se replican siendo finalmente liberados infectando otros macrofagos y de esta forma ampliando la infeccion. Poco es el conocimiento que se tiene acerca de como ocurre el proceso de liberacion de amastigotes de Leishmania que infectan macrofagos. Se sospecha que este mecanismo puede estar ocurriendo por un proceso de fusion de membranas. Mediciones de capacitancia de la membrana del macrofago y el uso de inhibidores de fusion de membranas soportan esta idea. El objetivo de este trabajo fue realizar seguimientos del ciclo infectivo de Leishmania amazonensis, para confirmar los hallazgos previos en cuanto a los tiempos en que probablemente puede estar ocurriendo la salida del amastigote. Ademas, se busco determinar la viabilidad del parasito a lo largo del ciclo infectivo con el fin de comprender mejor la interaccion hospedero-patogeno en el modelo in vitro; para ello se midio: viabilidad del parasito con tincion de diacetato de fluoresceina (DAF) y ioduro de propidio (IP), porcentaje de infeccion y numero de parasitos por celula (p/c). Los resultados sugieren que la salida de los parasitos puede presentarse entre las 72 y 78 horas post infeccion (hpi) y entre las 96 y 120 hpi. Con los resultados de trabajos previos, y los datos presentados en este estudio, se ha propuesto que L. amazonensis puede presentar dos ciclos infectivos que se desarrollan durante cinco dias en nuestras condiciones de cultivo in vitro. En las primeras 36-48 hpi el parasito se diferencia a amastigote. Despues de su diferenciacion comienza su division celular. Luego de las 72 hpi ocurre una disminucion en el numero de parasitos por celula (p/c) que ha sido relacionada con el momento en el cual podria salir el parasito de su celula hospedera. La recuperacion del numero de p/c a las 96 hpi y la disminucion presentada a las 120 hpi sugieren la ocurrencia de un nuevo ciclo infectivo. La viabilidad del amastigote se vio afectada a medida que transcurrio la infeccion. Durante las primeras 24 hpi practicamente todos los parasitos fueron viables (93,85%) y se observaron de color verde intenso dentro de las VP por marcaje con la sonda DAF. Entre el tercer y cuarto dia se presento una disminucion significativa en la viabilidad de los parasitos p = 0,017 y p = 0,0097 respectivamente. Entre el tercer y quinto dia post infeccion el cultivo en general se observo mas deteriorado y se encontro una cantidad considerable de macrofagos no viables, pero aun con parasitos viables en el interior de la VP. Estas observaciones se han interpretado como competencia en el cultivo, lo que generaria deficit alimenticio, explicando la drastica disminucion en la viabilidad general del cultivo. El descenso diario de un grupo de celulas infectadas podria ser la causa de la disminucion en los porcentajes de infeccion. En este trabajo se desarrollo un metodo eficiente para marcar la membrana de macrofagos infectados con los analogos fluorescentes de fosfolipidos NBD-PE y RHO-PE con el fin de implementar la tecnica FRET, y asi evidenciar la fusion de una membrana no marcada como la de la VP, con una membrana previamente marcada como la del macrofago. Se estipulo que la concentracion de 5 μg/mL y 10 μg/mL para las pruebas RHO-PE y NBD-PE respectivamente, puestas en contacto con macrofagos infectados en nuestras condiciones, fueron capaces de marcar clara y continuamente la membrana celular del 95,9% y 97,0% de los macrofagos. Asi mismo, con la menor formacion de vesiculas de la sonda comparada con otras concentraciones y con una permanencia del marcaje mas halla de las cinco horas. Este marcaje constituye un gran avance que permitira obtener mediciones cuantitativas de procesos de fusion de membranas en sistemas complejos como los constituidos por el macrofago y el parasito Leishmania. El hecho de haber marcado la membrana de macrofagos infectados con estas sondas resulta interesante y se convierte en una herramienta clave que permitira aplicar la tecnica de FRET para determinar la ocurrencia de eventos de fusion relacionados con la salida del parasito.