Se evaluo el efecto de la adicion de acido docosahexaenoicoe (DHA) y eicosapentaenocio (EPA) a una mezcla de acido linoleico (ALi) y alfa-linolenico (ALn), sobre su biohidrogenacion, en fluido ruminal in vitro. A 500 mg de kikuyo, se agregaron 18 μL de una mezcla de ALi:ALn (75:25) (Control) o una mezcla de 14,9 μL ALi:ALn (75:25) con 3,1 μL de una mezcla que contenia cuatro relaciones de DHA:EPA (100:0, 75:25, 25:75, 0:100). El kikuyo sin adicion de acidos grasos (AG) (Control negativo) o con adicion de estos, fue incubado con fluido ruminal por triplicado, durante 0, 5 o 16 horas, en tubos de 50 mL. Los lipidos del material incubado fueron extraidos, metilados y analizados para AG por CG-FID. Las concentraciones relativas (g/100 g AG) de los AG incubados y los principales productos de la isomerizacion y biohidrogenacion se compararon mediante un modelo completamente al azar, usando el PROC GLM de SAS. La concentracion relativa de ALi y ALn disminuyo con el tiempo de incubacion, pero no fue diferente entre tratamientos con EPA y DHA a las 16 horas. La adicion de DHA y EPA puros o en mezclas disminuyo la concentracion relativa de C18:0 (P < 0,01) e incremento la de C18:1 trans-11 (ATV) (P < 0,01) y C18:2 trans-11, cis-15 (P < 0,01) (ALC), mientras que los cambios en la concentracion relativa del C18:2 cis-9, trans-11 no fueron claros. Los resultados sugieren que la accion inhibitoria del EPA y DHA ocurre en los pasos finales de la biohidrogenacion del ALi y del ALn.