Antecedentes. Los organismos vivos responden al estres aumentando la sintesis de proteinas. El estres por choque termico ha sido el mas estudiado y las proteinas que se inducen, se han denominado genericamente como proteinas de choque termico. Objetivo. En este trabajo se establecieron las condiciones optimas de produccion de la proteina HSC70, expresada en E.coli BL21 (DE3) y de los anticuerpos policlonales que permitan identificarla. Material y metodos. Mediante varios ensayos se establecieron las concentraciones optimas del agente inductor isopropil-b-D-thiogalactopiranosido (PTG), del inoculo bacteriano, de empleo de los plasmidos de expresion pET-3a y pET-28a (+); y el metodo mas eficiente para la recuperacion de las formas soluble o insoluble de la proteina y de anticuerpos policlonales que la identifiquen. Resultados. Encontramos que el inoculo de cinco colonias con IPTG (2mM) en tubos con cinco mililitros de medio modificado e incubadas por 24 horas a 37°C con agitacion constante (200 r.p.m) y tratamiento de sonicacion, produce el mejor rendimiento de HSC70. La calidad de la proteina inducida se establecio mediante “Western blotting”. Conclusion. La proteina recombinante asi obtenida permitio, generar anticuerpos policlonales que a su vez permiten detectar la proteina HSC70 natural en la membrana citoplasmatica de diferentes celulas por inmunofluorescencia, en ELISA, en Western Blot y en pruebas de bloqueo de infeccion de rotavirus.
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Heat shock proteins research
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FuenteDOAJ (DOAJ: Directory of Open Access Journals)