Titulo en ingles: Expression and purification of rotavirus structural proteins VP5* and VP8* in bacteria E. coli BL21(DE3) Resumen La caracterizacion de las proteinas estructurales del rotavirus y de las proteinas de la superficie de la celula hospedera implicadas en la union y penetracion del virion requiere de la disponibilidad de cantidades suficientes y de alto grado de pureza de estas proteinas. Por lo tanto, el objetivo de este trabajo fue expresar y purificar las proteinas estructurales del rotavirus de la cepa RRV, VP5* y VP8*, y producir anticuerpos policlonales dirigidos contra ellas. Se expresaron las proteinas recombinantes VP5* (rVP5*) y VP8* (rVP8*) en bacterias E. coli BL21(DE3) transfectadas con el plasmido pGEX-4T que contenia sus secuencias codificantes. Se consideraron como variables el medio de crecimiento, numero de bacterias antes de inducir la expresion, concentracion del inductor y tiempo de induccion. La mayor proporcion de rVP8* se obtuvo cuando las bacterias transformadas se cultivaron en medio LB y la induccion se llevo a cabo con 1 mM de IPTG cuando el cultivo alcanzo una OD 600 nm de 0.5 y la induccion se mantuvo durante 6 h. rVP5* alcanzo la mayor proporcion cuando celulas a una OD 600 nm de 0.2 fueron inducidas con 0.5 mM de IPTG durante 4 h en medio 2XYT en presencia de glucosa al 2 %. Las proteinas recombinantes obtenidas, acumuladas en la fraccion insoluble, fueron solubilizadas con detergentes ionicos y no ionicos, seguido de purificacion mediante cromatografia de afinidad antes de ser empleadas como antigenos para la produccion de anticuerpos policlonales en conejos. Estos anticuerpos se caracterizaron mediante su capacidad de reconocimiento de los antigenos correspondientes en ELISA, “Western blotting”, y en ensayos de inmunocitoquimica en celulas infectadas con rotavirus RRV. La cantidad y el grado de pureza de las proteinas recombinantes obtenidas, y los anticuerpos dirigidos contra ellas, anticipan su utilidad como herramientas en la caracterizacion de la interaccion virus-celula. Palabras clave: rotavirus; VP5*; VP8*; proteinas recombinantes; E. coli BL21(DE3) Abstract The characterization of rotavirus structural proteins and the cell surface proteins involved in virion binding and penetration depends on the availability of substantial amounts of highly purified proteins. The aim of the present work was to express and purify the rotavirus structural proteins VP5* and VP8* in order to produce polyclonal antibodies against them. Recombinant proteins VP5* (rVP5*) and VP8* (rVP8*) were expressed in E. coli cells transfected with pGEX-4T or pET 28a containing their corresponding encoding sequences. Culture medium, bacterial concentration before induction, inductor concentration and induction time were used as variables. The greater proportion of rVP8* was obtained when transfected bacteria were grown in medium LB and induction was started by adding 1 mM IPTG to cells at OD 600 nm 0.5 followed by 6 h-induction. The highest proportion of rVP5* was reached when cells at OD 600 nm 0.2 were induced with 0.5 mM IPTG for 4 h in medium 2XYT containing 2% glucose. The recombinant proteins accumulated in the insoluble fraction were solubilized with ionic and non-ionic detergents, and purified by affinity chromatography before being used as antigens for production of rabbit polyclonal antibodies. The antibodies produced were characterized through their ability to recognize the corresponding antigens in ELISA, Western blotting, and immunochemistry assays in rotavirus infected cells. The amount and purity of recombinant proteins obtained in this work, and the antibodies against them, are expected to be useful for the characterization of the virus-cell interaction. Keywords: rotavirus; VP5*; VP8*; recombinant proteins; E. coli BL21(DE3)