La diferenciacion rapida de colonias bacterianas es esencial en muchos campos industriales, cientificos y de salud humana y animal. Generalmente esa diferenciacion se logra por tecnicas microscopicas, bioquimicas o geneticas muy elaboradas que requieren tiempo y entrenamiento. En este estudio se utilizaron tecnicas de analisis de imagenes sobre patrones de difraccion de luz laser para evaluar su sensibilidad en la diferenciacion de colonias bacterianas. Adicionalmente se estudio el efecto del tiempo de crecimiento de las colonias en la generacion de estos patrones y se determino la influencia de la cantidad de medio de cultivo en la difraccion de luz laser. Los patrones de difraccion del laser se obtuvieron sobre cultivos puros de cinco aislamientos bacterianos B1, B2, B3, B2Ca y B2Cb. En la primera prueba de diferenciacion se utilizaron colonias de B2, B3, B2Ca. En el estudio del efecto del tiempo de crecimiento sobre patrones de difraccion, las bacterias B1 y B2Cb con uno o dos dias de crecimiento. Finalmente, el efecto de la cantidad de medio de cultivo en la difraccion de la luz, se evaluo en una prueba en cajas petri con 10, 15 o 20 ml de medio de cultivo esteril sin colonias de bacterias. Mediante un analisis de escalado multidimensional realizado con los parametros de textura extraidos de las imagenes de los patrones, se obtuvo un agrupamiento adecuado de los patrones asociados a las colonias de cada bacteria evaluada, lo cual indico que las colonias bacterianas se pueden diferenciar por sus patrones de difraccion. Adicionalmente se encontro que no hay variaciones significativas en los patrones de difraccion obtenidos de dos aislamientos bacterianos en dos tiempos de crecimiento. El espesor del medio de cultivo afecto la difraccion del haz de luz pues patrones obtenidos de cajas petri con 10 ml se separan completamente de los patrones obtenidos con 15 y 20 ml, aunque no hay diferencias entre los dos ultimos volumenes. Los resultados indican que esta tecnica sencilla parece ser altamente sensible para diferenciar colonias bacterianas en medios de cultivo, y su refinamiento e implementacion para investigacion o uso industrial podria lograrse a partir de materiales facilmente disponibles a nivel local.