Antecedentes. En la actualidad, no se dispone de integrina b3 de manera comercial y la PDI comercial tiene costos muy altos, lo cual dificulta el acceso a estas dos proteinas para realizar estudios conducentes a establecer si b3 y PDI interactuan con cepas de rotavirus silvestres. Objetivo. Explorar una metodologia que permitiese aislar las proteinas b3 y PDI a partir de plaquetas humanas para generar anticuerpos policlonales en conejo contra la integrina b3 y evaluar la interaccion entre las proteinas PDI y b3 con el rotavirus ECwt. Material y metodos. Mediante la tecnica de electroforesis preparativa en condiciones reductoras, se separaron las proteinas de un lisado de plaquetas humanas y posteriormente se electroeluyeron. Mediante las tecnicas de coinmunoprecipitacion, “Western blotting” y ELISA de captura se analizo la interaccion del rotavirus ECwt con las proteinas b3, y PDI. Resultados. Las proteinas totales de un lisado de plaquetas humanas se separaron mediante electroforesis en condiciones reductoras, se identificaron las proteinas b3 y PDI en un segmento del gel, utilizando anticuerpos comerciales en “Western blotting” y luego se aislaron estas dos proteinas del resto del gel. Posteriormente las proteinas se electroeluyeron del segmento del gel y se analizo su pureza. La proteina b3 se utilizo para generar anticuerpos policlonales en conejo. Igualmente, b3 y PDI eluidas se incubaron con el rotavirus ECwt y mediante la tecnica de co-inmunoprecipitacion y ELISA de captura encontramos que estas dos proteinas se unen in vitro. Esta misma union se observo cuando se incubo las vellosidades aisladas de intestino delgado de raton lactante con el rotavirus. Conclusion. Se logro purificar parcialmente a partir de plaquetas humanas, utilizando electroforesis preparativa, cantidades relativamente altas de proteina b3 y PDI. El aislamiento de estas proteinas nos permitio generar un anticuerpo policlonal contra b3 y establecer que b3 y PDI se unen in vitro, luego de incubar las proteinas aisladas con el rotavirus ECwt, e in vivo, despues de incubar el rotavirus con las vellosidades aisladas del intestino delgado de raton lactante de la cepa ICR.
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Viral gastroenteritis research and epidemiology
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FuenteDOAJ (DOAJ: Directory of Open Access Journals)