Dentro del proceso para la obtencion de plantas transgenicas, la seleccion es una etapa fundamental puesto que permite identificar el material potencialmente transformado. Los metodos convencionalmente utilizados son efectivos, pero han sido ampliamente cuestionados, principalmente por aspectos relacionados con bioseguridad, por lo cual, se han desarrollando nuevas estrategias para su reemplazo. Dentro de estas, el sistema de seleccion positiva pmi/manosa, ha demostrado alta efectividad en la identificacion de plantas transgenicas de distintas especies. Con el objetivo de desarrollar un sistema de seleccion pmi/manosa para la variedad Diacol Capiro, se establecieron las condiciones necesarias para la transformacion de entrenudos con la cepa LBA4404 de Agrobacterium tumefaciens que contiene el vector binario pNOV022, obteniendose tasas regenerativas del 80-100% y plantas entre la septima y novena semana. Se evaluo el efecto de diferentes concentraciones de manosa sobre la viabilidad y capacidad regenerativa de los explantes, escogiendo la combinacion manosa 5g/l y sacarosa 10 g/l para su posterior evaluacion en el medio de seleccion; ademas se corroboro la utilidad de la manosa como agente selectivo. Los distintos procesos selectivos realizados, generaron frecuencias de seleccion entre 1 y 20%, con tasas esperadas de escapes entre 0 y 8%. El analisis por PCR determino amplificacion de un fragmento especifico pmi en dos plantas provenientes de un mismo explante, correspondiendo a una frecuencia de transformacion del 2,8%. La prueba del rojo de clorofenol indico expresion indirecta de la proteina PMI en las dos plantas PCR positivas.
Tópico:
Plant tissue culture and regeneration
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FuenteDOAJ (DOAJ: Directory of Open Access Journals)