El picudo del algodonero, Anthonomus grandis Boheman (Coleoptera: Curculionidae), es considerado la principal plaga del cultivo de algodon en Colombia, no solo por los danos economicos y sociales que causa, sino porque con sus apariciones tempranas altera e interrumpe el desarrollo de los programas de manejo integrado de plagas. La importancia de un manejo inteligente radica en el hecho de que este insecto se comporta como plaga ‘clave’, con una capacidad de dano en el cultivo entre 50% y 90%, si no se controla. En el presente estudio se establecio una metodologia de bioensayo que determino la actividad toxica de proteinas Cry3Aa y Cry1Ia de cepas de B. thuringiensis sobre larvas de primer instar de A. grandis. En los bioensayos se empleo una dieta artificial mezclada con los extractos bacterianos que contenian el complejo espora-cristal de cada cepa. Los resultados indicaron que la cepa de referencia variedad san diego presento toxicidad sobre larvas de primer instar de A. grandis, en condiciones de laboratorio, con una concentracion letal 50 (CL50) de 147,6143 μg de proteina total por mililitro de volumen final de dieta artificial, representando una alternativa potencial para el manejo de este insecto plaga del cultivo de algodon.