Premio Aventis – Ciencias Basicas y Experimentales. LIBROS DE MEDICINA. Los osteoclastos son celulas grandes multinucleadas, tienen diferentes caracteristicas que incluyen la expresion de la fosfatasa acida resistente al tartrato (TRAP), receptor de calcitonina (RCT) y la capacidad de resorber hueso. Su origen no se ha dilucidado plenamente, sin embargo hay evidencias que sugieren que los osteoclastos proceden de la fusion de precursores mononucleares pertenecientes al linaje monocito/macrofago. En este trabajo quisimos evaluar si es la fusion per se la que promueve la actividad de los osteoclastos o si se requiere activacion previa de los precursores de osteoclastos con hormonas osteoclastogenicas. Para responder esta pregunta fusionamos artificialmente macrofagos de la linea celular U937/A (humanos) o J774 (raton) con polietilenglicol (PEG) en un estado no confluente del cultivo. Se evaluo la capacidad de formacion de “TRAP positive multinuclear cell” (TPMNC) y su capacidad resortiva sobre laminas de hueso bovino tanto en macrofagos sin estimular como pre estimulados con hormona paratiroidea (PTH), 1a,25-(OH)2D3, dexametasona, RANKL o BMP2. Los resultados mostraron que al fusionar macrofagos con PEG de ambas lineas se aumento el numero de celulas TRAP positivas al igual que su capacidad resortiva. Ademas la confluencia del 100% y la sincronizacion de las celulas en metafase y Go aumentan la formacion de TPMNC. Respecto a las hormonas, la PTH (0.01µM) aumento la capacidad resortiva de las TPMNC, mientras que la 1a,25- (OH)2D3, dexametasona, RANKL y BMP2 disminuyeron dicha capacidad. Concluimos que la fusion de macrofagos de las lineas celulares U937/A o J774 con PEG induce la formacion de celulas multinucleadas con actividad resortiva y en todos los experimentos se demostro que es la fusion per se, mas no los estimulos con hormonas osteoclastogenicas, excepto PTH, el evento que lleva a la formacion de celulas con actividad resortiva. (El articulo completo esta siendo sometido para publicacion por la revista «Bone» y consta de 15 figuras no presentadas aqui). Palabras claves: Fusion de macrofagos, osteoclasto, polietilenglicol, TRAP, resorcion osea. INTRODUCCION El hueso tiene un recambio constante como resultado de la actividad de los osteoblastos y los osteoclastos, en el cual los osteoclastos degradan la matriz organica e inorganica del hueso y el proceso es revertido por los osteoblastos en un proceso fisiologico llamado remodelamiento oseo (1).Se ha demostrado que algunos factores como el RANKL y MCS-F secretados por las celulas estromales/osteoblastos estimulan la osteoclastogenesis (1). Estas dos citoquinas son requeridas para inducir la expresiontanto de genes que tipifican el linaje osteoclasto como de los genes que codifican para la fosfatasa acida resistente al tartrato (fosfatasa acida resistente al tartrato) (TRAP), catepsina K (CATK), receptor de calcitonina (CT) y la integrina s3 lo que lleva al desarrollo de osteoclastos maduros (1, 2).Una vez las celulas precursoras de los osteoclastos han proliferado se lleva a cabo la fusion de dichas celulas (3). La fusion celular es un evento en el cual las membranas de las celulas a fusionarse se acercan, entran en contacto y tras mezclar los lipidos de sus bicapas forman un poro de fusion el cual se expande y permite el contacto de los citoplasmas (4, 5). Una hipotesis sugiere que los macrofagos en respuesta a estimulos locales, expresan una maquinaria de fusion proteica, la cual es inducida inicialmente y reprimida cuando se completa la fusion/multinucleacion. Se han descrito tres proteinas involucradas en la fusion de macrofagos: el receptor de fusion de macrofagos (MFR) (7), CD47 y CD44 (9). Se han identificado varias moleculas que intervienen en la diferenciacion y activacion de los osteoclastos (10) como M-CFS (macrophague colony-stimulating factor), RANKL (receptor activator nuclear factor kappa B ligand), bone morphogenetic proteins (BMPs) las cuales son miembros de la superfamilia del factor de crecimiento transformante (TGF-s); su efecto es aumentar la diferenciacion de los osteoclastos. Dentro de las BMPs se encuentra la BMP2 la cual aumenta la formacion de los osteoclastos a partir de macrofagos derivados de medula osea (11). Igualmente, la PTH (2, 12, 13) y la 1a,25-(OH)2D3 (14) tienen efectos sobre el hueso tanto en la formacion como en la degradacion de este ya que ambas hormonas estimulan la expresion de genes involucrados en la formacion osea en los osteoblastos asi como tambien la expresion de RANKL, citoquina que promueve la formacion de osteoclastos. Por su caracter de celulas multinucleadas, los osteoclastos no se reproducen; esto hace que experimentalmente sea dificil tener un cultivo primario de estas celulas o una linea celular. Con los modelos reportados en la literatura para obtencion de osteoclastos (2, 6, 11, 12, 15, 16, 17, 18) no se puede separar el efecto que pueda tener la confluencia celular o elrepetidas con el procedimiento GLM de SAS. El nivel de significancia usado fue de 95% (alpha =0.05)...