Resumen Objetivos: Ev aluar diferentes tratamientos de preservacion de especimenes Anopheles albimanus , para conocer su utilidad para conservar la cantidad y calidad del ADN que permita su analisis en estudios moleculares posteriores. Materiales y metodos: E studio comparativo experimental con tres bloques de tratamientos de preservacion: silica gel, etanol y congelacion, los dos ultimos bloques se dividieron en dos niveles cada uno: etanol absoluto, etanol al 70% y congelacion a -20°C, congelacion a -80°C, respectivamente. El bloque control estuvo conformado por especimenes frescos sin tratamiento de preservacion. S e extrajo el ADN de cada especimen, se cuantifico por espectrofotometria y se amplifico el espaciador interno transcrito 2 (ITS2) mediante PCR . Se realizo un analisis comparativo entre bloques de tratamiento usando la frecuencia de amplificacion de ITS2. Resultados: Se obtuvo la amplificacion de ITS2 de t odos los especimenes sin preservacion previa, del 60% de los preservados en silica gel y del 20% de los preservados en congelacion a -80oC y en etanol al 70% . Se hallo diferencia estadisticamente significativa (p 0,05), entre el indice DO260/DO280 y la concentracion de ADN de los especimenes que presentaron amplificacion de ITS2. Conclusiones: Los datos sugieren que la conservacion en silica gel o la congelacion a -80°C, pueden ser las mejores condiciones para la preservacion de especimenes Anopheles a utilizar en estudios moleculares posteriores. Palabras claves: Anopheles, malaria, ADN, preservacion de muestras, Reaccion en Cadena de la Polimerasa. Abstract Objetives: To e valuate different preservation treatments for Anopheles albimanus specimens , to know their utility in conserving the quantity and quality of DNA to be used in subsequent molecular studies. Materials and Methods: E xperimental comparative study conducted with three blocks of preservation treatments: silica gel, ethanol and freezing, each of the last two blocks were divided into two levels: absolute ethanol, 70% ethanol and freezing at -20 °C, freezing at -80 °C, respectively. The control block consisted of specimens without preservation treatment. DNA was extracted from each specimen, then quantified by spectrophotometry and the Internal Transcribed Spacer 2 (ITS2) was amplified by PCR. A comparative analysis between treatment blocks was carried out based on the frequency of ITS2 amplification. Results: ITS2 amplification was obtained in all specimens without previous preservation, in 60% of those preserved in silica gel and in 20% of those preserved at -80oC and in 70% ethanol. A statistically significant difference (p 0.05) between the DO260/DO280 index and the DNA concentration of specimens presenting ITS2 amplification. Conclusions: The data suggest that the preservation of specimens in silica gel or frozen at -80°C may be the best conditions to preserve Anopheles specimens for subsequent molecular studies . Keywords: Anopheles, malaria, DNA, sample preservation, Polymerase Chain Reaction.
Tópico:
Malaria Research and Control
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FuenteDOAJ (DOAJ: Directory of Open Access Journals)