Rhipicephalus microplus es la garrapata mas prevalente, responsable de transmitir hemoparasitos en ganado bovino de areas tropicales y subtropicales. Polimorfismos en su genoma confieren resistencia a los acaricidas usados para su control. Una mutacion en el gen Est9 que codifica una carboxilesterasa en R. microplus, confiere resistencia a compuestos organofosforados. Este estudio identifico una mutacion en garrapatas de campo, colectadas en un predio con historial de resistencia hacia acaricidas organofosforados mediante el uso de PCR – RFLP. Las garrapatas fueron sometidas a un compuesto organofosforado comercial del 83% de concentracion, en una prueba de inmersion de teleoginas y el ADN de garrapatas fenotipicamente susceptibles, resistentes y medianamente resistentes fue extraido y usado en la amplificacion de un fragmento de 372 pb del gen Est9, mediante el uso de cebadores especificos. Los productos de PCR fueron digeridos con la edonucleasa EcoRI, registrandose el patron de bandas en los genotipos homocigoto natural, homocigoto mutante y heterocigoto. La prueba exacta de Fisher arrojo diferencias altamente significativas (p=0.0022) entre teleoginas susceptibles y aquellas con algun nivel de resistencia, mostrando relacion directa entre fenotipo y genotipo. Asi, se comprobo por primera vez en Colombia la presencia de una mutacion en el gen Est9 de garrapatas R. microplus resistentes a organofosforados.