Antecedentes. Las enterobacterias, antano flora normal del tracto gastrointestinal, han cambiado su biologia y emergido como agentes patogenos nosocomiales que se tornan resistentes a los antibioticos conocidos. Objetivo. Realizar la caracterizacion epidemiologico-molecular de 20 aislamientos de Enterobacter cloacae resistentes a cefalosporinas de tercera generacion; provenientes de un hospital de tercer nivel de Bogota-Colombia. Material y metodos. Los aislamientos fueron identificados mediante sistemas automatizados Microscan y VITEK, se utilizo el Enterobacter asbureae como control externo inter-especie. La confirmacion de resistencia se hizo por tecnica de difusion en agar, y una vez establecida se realizo BLEE para comprobacion. La determinacion de puntos isoelectricos se hizo, mediante lisis por ultrasonido y la genotipificacion mediante la metodologia para bacterias Gramnegativas propuesta por Versalovic. Resultados: Los aislamientos colectados durante un ano fueron causantes de 15 casos de infeccion Intrahospitalaria y dos colonizaciones. Todos los aislamientos presentaron resistencia a cefotaxima, ceftazidima, ceftriaxona, aztreonam y ciprofloxacina, 95% a amikacina, gentamicina y cloranfenicol, 75% a trimetoprim/sulfametoxazol, 20% a cefepime y todos fueron sensibles a imipenem. Dos aislamientos fueron confirmados como productores de â-lactamasas de espectro extendido (BLEE) por la tecnica microbiologica de disco combinado. Por isoelectroenfoque presentaron dos â-lactamasas con puntos isoelectricos (pI) de 5,4 y 8,2. En los 18 aislamientos no inhibidos por acido clavulanico, se detectaron entre 2 y 4 â-lactamasas con pI de 5,4; 6,0; 7,0; 8,2 y mayor que 8,2; la resistencia a cefalosporinas de tercera generacion podria ser atribuida a la hiperproduccion de AmpC; los valores de pI sugieren la produccion simultanea de â-lactamasas tipo SHV y TEM. La genotipificacion mediante tres metodologias de rep-PCR (ERIC; REP y BOX) agrupo la poblacion estudiada en siete clones: seis constituidos por un solo aislamiento y el clon predominante E1/B1/R1 agrupo 14 aislamientos causantes de infeccion en diez pacientes. Conclusion. Se identifico un clon de Enterobacter cloacae multirresistente, endemico en una institucion de tercer nivel en Bogota, causante de infeccion nosocomial y quirurgica en particular.