La presencia de antibióticos en alimentos se ha convertido en una de las principales preocupaciones de los consumidores, esto ha llevado a que los laboratorios tengan que desarrollar métodos analíticos específicos que permitan analizar un mayor número de antibióticos, en el menor tiempo posible y con alta confiabilidad. En este sentido, el presente trabajo tiene como objetivo desarrollar y optimizar un método para la determinación de residuos de antibióticos en leche. Para esto, se empleó el método QuEChERS en la extracción de las muestras y cromatografía líquida ultra rápida acoplada a espectrometría de masas (UFLC-MS). Las condiciones de operación del UFLC-MS, fueron optimizadas a través del uso de diferentes diseños experimentales. Los factores estandarizados correspondieron a: composición de la fase móvil, voltaje del capilar, temperatura de la línea de desolvatación, temperatura del bloque de calentamiento, flujo de los gases de secado y nebulización. Finalmente, el método optimizado se evaluó con muestras de leche fortificadas y se encontró que los niveles de detección del método son inferiores a los límites máximos de residuos para la mayoría de antibióticos.