El orden Ephemeroptera es un grupo diverso en el Neotrópico, muy importante a nivel ecológico y como bioindicador, además, presenta amplia distribución en el departamento del Tolima. En esta investigación, se realizaron 2 muestreos durante periodos climáticos contrastantes en tres estaciones de muestreo en la parte alta, media y baja de la microcuenca río Anaime. Se colectó el material biológico aplicando metodologías cuantitativas y cualitativas. Los organismos se determinaron hasta el nivel de género, se estimó abundancia, diversidad alfa y beta a escala temporal y espacial utilizando el software RStudio. En total se colectaron 1145 organismos, distribuidos en 3 familias, Baetidae presentó la mayor abundancia, contrario a Leptophlebiidae. Se encontraron 8 géneros, siendo Baetodes el más abundante, mientras que Mayobaetis y Prebaetodes los menos abundantes. En los sustratos hojarasca y mixto se presentó la mayor abundancia relativa de organismos, contrario a la arena y grava. El orden Ephemeroptera estuvo representado por el 43% de las familias y 19% de los géneros reportados para el Tolima. La mayor diversidad se registró en la parte alta y media de la microcuenca durante el periodo de bajas lluvias, mientras que la mayor abundancia se presentó en la parte baja de la microcuenca durante el periodo de altas lluvias. La composición y diversidad de los efemerópteros en la microcuenca del río Anaime pudo estar influenciada principalmente por los periodos climáticos, la altitud y los sustratos disponibles.