Introducción. La tuberculosis persiste en el escenario epidemiológico nacional, en el país se notificaron 289 casos de tuberculosis en trabajadores de la salud en el 2022, esta enfermedad en los trabajadores sanitarios está relacionada con los bajos niveles de conocimiento, las medidas de autocuidado deficientes y baja calidad de atención en salud. El objetivo del estudio fue validar un instrumento de evaluación de conocimientos, actitudes y prácticas sobre tuberculosis en trabajadores de la salud. Metodología. Estudio metodológico. Se validó el contenido con 5 expertos, la validación de apariencia con 32 trabajadores de la salud (TS) y la validación de constructo con 140 TS. Los criterios de inclusión y exclusión dependen de la fase de validación. Los datos fueron procesados en SPSS. Resultados. El Instrumento se conforma de tres dimensiones: conocimientos, actitudes y prácticas, y 43 ítems. La validación de contenido alcanzó un Índice de Validez de Contenido Global de 0.96. La validación de apariencia demostró la comprensibilidad de los ítems en un 84%. El análisis factorial exploratorio ratificó la conformación de las tres dimensiones con una medida de adecuación muestral de Kaiser-Meyer-Olkin (0.741). Finalmente, el instrumento alcanzó un Alfa de Cronbach global de 0.72. Discusión. En Colombia no se identificaron instrumentos validados y confiables que evaluaran esta temática. Diferentes investigaciones en el mundo han señalado la utilidad y efectividad de este tipo de herramienta. Conclusiones. El instrumento en trabajadores “evaluado” mostró validez de contenido, constructo y apariencia para medir conocimientos, actitudes y prácticas sobre la tuberculosis en trabajadores de la salud.