El objetivo del presente estudio fue evaluar el efecto de dos niveles: prostaglandina y glicosaminoglicanos en la motilidad espermática. Un total de 90 muestras fueron obtenidas de 3 machos adultos de la raza Gyr (animales del Centro de Biotecnología del Caribe CBC; SENA, Valledupar) divididas en 6 tratamientos y 5 repeticiones por tratamiento. Todos los eyaculados fueron evaluados y luego divididos en 6 alícuotas y congelados mediante un protocolo estándar empleando el diluyente comercial Andro-Med®. Después de la congelación, se evaluó motilidad espermática (mediante análisis espermático asistido por computadora CASA). El tratamiento control y el tratamiento de 0,1 µL de cloprostenol presentaron valores estadísticamente (P=0,05) superiores para la mayoría de parámetros seminales evaluados: Motilidad (68,71±26,3 % y 60,80±12,9 %, respectivamente); y progresividad (18,75±11,3 % y 17,01±6,9 %, respectivamente). El tratamiento de 0,1 µL ácido hialurónico presentó los mejores valores en los parámetros de velocidad curvilínea (VCL), velocidad media (VAP) y la amplitud media del desplazamiento lateral de la cabeza del espermatozoide (ALH). Para los parámetros velocidad rectilínea (VSL), índice de linealidad (LIN), índice de rectitud (STR), índice de oscilación (WOB), y frecuencia de batido de cabeza (BCF), no existieron diferencias estadísticas (P=0,05). Concluyendo, los datos obtenidos en el estudio reflejan daños espermáticos debido al proceso de criopreservación de espermatozoides bovinos en el CBC.